1、産品內(nèi)容：

* KEIris 5× RT All-in-One Mix  包含以下組分：逆轉錄酶，RNA 酶抑制(zhì)劑，

dNTPs, buffer，Oligo(dT)20VN 和(hé)随機引物。

2、儲存條件：

儲存于-20℃，有(yǒu)效期一年。

3、産品介紹

① KEIris RT mix with DNase（All-in-One）是将 RNA 合成cDNA 的一個(gè)操作(zuò)更為(wèi)簡便的系統，含有(yǒu)第一鏈 cDNA 合成所需的全部試劑，僅需加入 RNA 模闆和(hé)水(shuǐ)即可(kě)進行(xíng)逆轉錄反應，操作(zuò)非常方便。使用該逆轉錄預混液 15 分鍾內(nèi)最長可(kě)獲得(de)12 kb 大(dà)小(xiǎo)的cDNA。合成的cDNA 推薦用于PCR、qPCR 反應。

② 該預混液采用特制(zhì)的高(gāo)效 DNase，該酶具有(yǒu)熱敏感性， 可(kě)在高(gāo)溫條件下快速不可(kě)逆地失活，因此僅需一次加樣，即可(kě)同管進行(xíng)去除基因組 DNA 污染與逆轉錄反應，與使用DNase I 去除基因組 DNA 污染相比，無需額外加入 EDTA 進行(xíng)失活，不僅減少(shǎo)了對 RNA 模闆的損傷、降低(dī) RNase 污染風險，而且節省實驗時(shí)間(jiān)。

4、使用方法

① 在冰浴的無核酸酶的離心管中配制(zhì)下列逆轉錄體(tǐ)系：

               注：推薦使用試劑盒提取的高(gāo)質量 RNA 作(zuò)為(wèi)模闆。

② 輕輕混勻，瞬時(shí)離心（使液體(tǐ)沉于底部）；

③ 在PCR儀上(shàng)進行(xíng)下列條件的反應： 

    37℃溫育 2 min，以去除基因組 DNA 污染；

    55℃，溫育 15 min；

    85℃，孵育 5 min，以終止反應

④ 将獲得(de)的産物迅速置于冰上(shàng)或立即保存于-20℃，用于後續實驗。

5、注意事項：

① RNA 模闆的純度和(hé)完整性是影(yǐng)響逆轉錄效果的重要因素， 如模闆中含有(yǒu)蛋白、EDTA、酚等雜質會(huì)使 RNA 降解。

② 若後續實驗為(wèi) qPCR，逆轉錄産物的加量應不超過 PCR 體(tǐ)系終體(tǐ)積的 1/10，如 20 μL 的 PCR 反應體(tǐ)系，逆轉錄産物的加量應不超過 2 μL。

③ 預混液中已經包含 Oligo(dT)20VN 和(hé)随機引物，不僅适用于包含 Poly(A) 結構的真核生(shēng)物 mRNA，也适用于不含Poly(A)結構的原核生(shēng)物 RNA、真核生(shēng)物 rRNA 和(hé) tRNA 等模闆，但(dàn)不适用于 miRNA 等小(xiǎo) RNA 模闆。