産品儲存：-20℃保存，有(yǒu)效期 12 個(gè)月。

制(zhì)品說明(míng)：2X F5 FastLong HiFi PCR Mix 包含DNA Polymerase 、dNTP、蛋白穩定劑以及經過優化的緩沖體(tǐ)系。本産品添加了獨特的蛋白穩定劑， 使DNA Polymerase的穩定性得(de)到大(dà)幅提升，使用時(shí)無需置于冰上(shàng)，常溫 操作(zuò)即可(kě)。極緻優化的緩沖體(tǐ)系保持了DNA Polymerase的高(gāo)保真性以及 擴增特異性，進一步提高(gāo)了擴增産量。此外，FastLong HiFi PCR Mix對PCR抑制(zhì)劑有(yǒu) 良好的抵抗能力，在細菌、真菌、血液以及動植物組織裂解液等粗品中均具有(yǒu)優異的擴增 性能。本産品使用時(shí)隻需要加入引物和(hé)模闆即可(kě)進行(xíng)PCR擴增， 簡化的步驟提高(gāo)了檢測通(tōng) 量及結果的可(kě)重現性。本品中的DNAPolymerase具有(yǒu)5‘→ 3’DNA聚合酶活性和(hé)3‘→ 5’核酸外切酶活性，其 擴增産物為(wèi)平末端。

适用範圍

本産品适用于以基因組DNA、cDNA、質粒DNA或粗品為(wèi)模闆的PCR反應。

*反應體(tǐ)系兼容Dpn I酶切，PCR完成後可(kě)直接加酶進行(xíng)酶切。

普通(tōng)PCR操作(zuò)流程

反應體(tǐ)系：各組分完全解凍後，可(kě)參考如下體(tǐ)系加入不同組分，充分混勻後采用Mini離心機将PCR管 內(nèi)液體(tǐ)甩到管底

初始變性溫度98°C設置為(wèi)30-60s，之後變性時(shí)間(jiān)在98°C 保持10-15s ，使得(de)酶活處于最佳狀态。退火(huǒ)時(shí)間(jiān)為(wèi)10-30s。對于簡單模闆如質粒，延伸時(shí)間(jiān)參照30s/1kb設置，對于cDNA或者複 雜基因組模闆，延伸時(shí)間(jiān)參照 45s /1kb設置, 但(dàn)請(qǐng)勿超過1min/kb。

退火(huǒ)溫度與引物的Tm值有(yǒu)關， 決定了PCR擴增反應的特異性， 如發現擴增特異性差， 可(kě)适當 提高(gāo)退火(huǒ)溫度，當引物Tm值超過69°C，建議删除退火(huǒ)步驟使用兩步方案，即使引物Tm>72°C， 仍在72°C下進行(xíng)退火(huǒ)及延伸。

注意事項：

1. 請(qǐng)使用98°C進行(xíng)變性。由于反應緩沖液中的鹽濃度較高(gāo)，FastHiFi PCR Mix在較高(gāo)的變性和(hé)退火(huǒ)溫度下性能更優。對于大(dà)多(duō)數(shù)模闆，建議初始變性步驟在98°C下進行(xíng)30s-1min，對于一些(xiē)複雜的模闆(如基因組DNA、cDNA )可(kě)能需要較長的初始變性時(shí)間(jiān)，時(shí)長可(kě)延長到3分鍾。

2. 延伸在72°C下進行(xíng)，延伸時(shí)間(jiān)取決于擴增片段的長度和(hé)複雜性。對于低(dī)複雜性模闆(如質粒、λDNA)，建議按照15-30s/1kb的速度計(jì)算(suàn)延伸時(shí)間(jiān)。對于高(gāo)複雜性模闆(如基因組DNA、cDNA模闆) 建議按照40s/kb的 速度計(jì)算(suàn)延伸時(shí)間(jiān)，以獲得(de)最佳結果，但(dàn)請(qǐng)勿超過1min/kb。

3. 由于FastHiFi PCR Mix是一種依賴于Mg2+的酶，但(dàn)過量的Mg2+可(kě)以穩定DNA雙鏈，防止DNA完全變性，引發錯誤模闆位點的假退火(huǒ)降低(dī)擴增特異性。反之，Mg2+不足也可(kě)能導緻産物收率降低(dī)。最 佳Mg2+濃度取決于dNTP濃度、特定模闆DNA和(hé)樣品緩沖液組成等，如果引物或模闆中含有(yǒu)EDTA或EGTA等螯合劑，則Mg2+最佳濃度需要提高(gāo)，優化時(shí)請(qǐng)以0.2 mM的步長增加Mg2+ 濃度。

4. FastHiFi PCR Mix産生(shēng)平末端的DNA産物。