1. 産品內(nèi)容：

注：微量體(tǐ)積試劑請(qǐng)在正式實驗開(kāi)始前進行(xíng)瞬時(shí)離心操作(zuò)

2. 儲存條件：

4℃保存，一年有(yǒu)效（避免冷凍）。

3. 産品介紹：

TRLIP高(gāo)效DNA Transfection Reagent是一種新型的陽離子脂質體(tǐ)轉染試劑。适合于将核酸DNA轉染入真核細胞，具有(yǒu)低(dī)細胞毒性；對多(duō)種類型的細胞和(hé)培養闆都具有(yǒu)高(gāo)轉染效率；轉染時(shí)血清的存在不影(yǐng)響轉染效率的優點。

TRLIP高(gāo)效DNA Transfection Reagent轉染試劑對于常見的哺乳動物細胞具有(yǒu)非常高(gāo)的轉染效率、重複性好、操作(zuò)簡單、無明(míng)顯的細胞毒性，并且對于貼壁細胞和(hé)懸浮細胞都适用。TRLIP高(gāo)效DNA Transfection Reagent主要适用于DNA 等單一成分的細胞轉染。

TRLIP高(gāo)效DNA Transfection Reagent轉染過表達質粒後，通(tōng)常24-48h後達到較高(gāo)的蛋白表達水(shuǐ)平，并且很(hěn)多(duō)情況下蛋白表達量在轉染後48h顯著高(gāo)于轉染後24h。

TRLIP高(gāo)效DNA Transfection Reagent轉染細胞時(shí)，基本不受細胞培養液中血清影(yǐng)響，即可(kě)以在血清存在的情況下進行(xíng)細胞轉染。但(dàn)為(wèi)了取得(de)最佳的轉染效果，推薦轉染時(shí)使用不含抗生(shēng)素培養液。轉染後不必去除轉染液，或者改變或添加培養基，但(dàn)轉染4-6h後可(kě)去除轉染液。

4. 使用方法：

① DNA轉染

對大(dà)多(duō)數(shù)細胞來(lái)說，DNA(μg)與TRLIP2000DNA (μl)的比例為(wèi)1:2-1:3。轉染時(shí)高(gāo)的細胞密度可(kě)以得(de)到高(gāo)的轉染效率和(hé)表達水(shuǐ)平，并能減少(shǎo)細胞毒性。

1. 以24孔闆為(wèi)例

貼壁細胞： 轉染前一天，用500 μl不含抗生(shēng)素的培養基接 種0.5～2×105細胞，使之第二天能達到70-90%彙合。 懸浮細胞：在準備DNA-TRLIP2000DNA複合物之前，用500ul不含抗生(shēng)素的培養基接種4～8×105細胞即可(kě)。

2. 對每個(gè)轉染樣品，進行(xíng)以下操作(zuò)

a. 在eppendorf管裏分别加入50 μl Opti-MEM I ReLipced Serum Medium和(hé)0.8 μg DNA輕柔混勻（不能渦旋或離心） ，制(zhì)成DNA稀釋液。

b. 在另一個(gè)eppendorf管裏分别加入50μl Opti-MEMI ReLipced Serum Medium和(hé)2.0 μl TRLIP2000DNA(注意用前 先混勻)，輕柔混勻，制(zhì) 成TRLIP2000DNA 稀釋液，室溫靜 置5分鍾。

c. 将DNA稀釋液和(hé)TRLIP2000DNA稀釋液混合，輕柔混勻，室溫靜置20分鍾，形成DNA-TRLIP2000DNA複合物。DNATRLIP2000DNA複合物在室溫下可(kě)穩定存在6小(xiǎo)時(shí)。

3. 将DNA-TRLIP2000DNA複合物加入到接種好的細胞中，将培養闆輕輕地前後搖動，使複合物分散均勻。

4. 在37℃ CO2培養箱中培養4-6小(xiǎo)時(shí)後更換培養基,繼續培養18～48小(xiǎo)時(shí)。

5. 如果要篩選穩定細胞株，則在轉染24小(xiǎo)時(shí)後将細胞按照1 :10或更高(gāo)的比例接種到新鮮培養基中，第二天加入選擇性培養基進行(xíng)篩選。

② 優化DNA轉染

質粒DNA轉染的優化 為(wèi)達到最高(gāo)的轉染效率和(hé)降低(dī)細 胞毒性的影(yǐng)響，可(kě)以對DNA和(hé)TRLIP2000DNA的比例以及細 胞密度進行(xíng)優化，一般在1:0.5-1:5的範圍內(nèi)優化DNA (μg)和(hé)TRLIP2000DNA (μl) 的比例。

不同細胞培養闆中轉染時(shí)培養基、核酸及TRLIP2000DNA 用量

常見細胞的TRLIP轉染效率（僅供參考，實驗條件不同轉染效率會(huì)有(yǒu)差别）

Lip轉染試劑用于不同細胞轉染時(shí)用量參考（以96孔闆為(wèi)例）

5.注意事項

1. 使用高(gāo)純度的DNA有(yǒu)助于獲得(de)較高(gāo)的轉染效率。
2. 轉染前細胞必須處于良好的生(shēng)長狀态。
3. 需自備不含抗生(shēng)素的無血清培養液或 Opti-MEM®培養液 或普通(tōng)的 DMEM 培養液。
4. TRLIP高(gāo)效DNA Transfection Reagent轉染試劑不能 vortex 或離心，宜緩慢晃動混勻。
5. 轉染試劑使用後請(qǐng)立即蓋好蓋子，避免長時(shí)間(jiān)暴露空(kōng)氣中。
6. 為(wèi)了您的安全和(hé)健康，請(qǐng)穿實驗服并戴一次性手套操作(zuò)。