儲存條件：

4℃保存，2 年有(yǒu)效

産品介紹：

RIPA 即 Radio Immunoprecipitation Assay，是一種傳統的細胞組織快速裂解液。裂解所得(de)的蛋白樣品可(kě)以用于常規的 Western、IP 等。主要成分是：50mMTris(pH 7.6)，150mM  NaCl，1% NP-40，0.5% sodiumdeoxycholate，0.1% SDS 等多(duō)種裂解劑和(hé)抑制(zhì)劑，能有(yǒu)效地抑制(zhì)蛋白 降解。 

對于培養細胞樣品： 

1.取适當量的NCM RIPA Buffer 裂解液，在使用前數(shù)分鍾內(nèi)加入PMSF，使PMSF的最終濃度為(wèi)1mM。 

注意： RIPA Buffer 不含蛋白酶等抑制(zhì)劑，根據需要在使用前添加蛋白酶，磷酸酶等抑制(zhì)劑 。 

2a.對于貼壁細胞：去除培養液，用 PBS、生(shēng)理(lǐ)鹽水(shuǐ)或無血清培養液洗一遍(如果血清中的蛋白沒有(yǒu) 幹擾，可(kě)以不洗)。按照 6 孔闆每孔加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下，使 裂解液和(hé)細胞充分接觸。通(tōng)常裂解液接觸細胞 1-2 秒(miǎo)後，細胞就會(huì)被裂解。

2b. 對于懸浮細胞：離心收集細胞，用手指把細胞用力彈散。按照 6 孔闆每孔細胞加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細胞。充分裂解後應沒有(yǒu)明(míng)顯的細胞沉澱。 如果細胞量較多(duō)，必需分裝成 50-100 萬細胞/管，然後再裂解。

對于組織樣品：

1、把組織剪切成細小(xiǎo)的碎片。

2、融解 RIPA 裂解液，混勻。取适當量的裂解液，在使用前數(shù)分鍾內(nèi)加入 PMSF，使 PMSF 的最終濃 度為(wèi) 1mM。

3、按照每 20 毫克組織加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可(kě)以适當添加 更多(duō)的裂解液，如果需要高(gāo)濃度的蛋白樣品，可(kě)以适當減少(shǎo)裂解液的用量)

4、用玻璃勻漿器(qì)勻漿，直至充分裂解。

5、充分裂解後，10000-14000g 離心 3-5 分鍾，取上(shàng)清，即可(kě)進行(xíng)後續的 PAGE、Western 和(hé)免疫沉澱 等操作(zuò)。

6. 如果組織樣品本身非常細小(xiǎo)，可(kě)以适當剪切後直接加入裂解液裂解，通(tōng)過強烈渦旋使樣品裂解 充分。然後同樣離心取上(shàng)清，用于後續實驗。直接裂解的優點是比較方便，不必使用勻漿器(qì)，缺點 是不如使用勻漿器(qì)那(nà)樣裂解得(de)比較充分。

注意事項：

1、RIPA 裂解液的裂解産物中經常會(huì)出現一小(xiǎo)團透明(míng)膠狀物，屬正常現象。該透明(míng)膠狀物為(wèi)含有(yǒu)基因 組 DNA 等的複合物。在不檢測和(hé)基因組 DNA 結合特别緊密的蛋白的情況下，可(kě)以直接離心取上(shàng)清 用于後續實驗；如果需要檢測和(hé)基因組結合特别緊密的蛋白，則可(kě)以通(tōng)過超聲處理(lǐ)打碎打散該透明(míng) 膠狀物，随後離心取上(shàng)清用于後續實驗。如果檢測一些(xiē)常見的轉錄因子，例如 NFκB、p53 等時(shí)，通(tōng) 常不必進行(xíng)超聲處理(lǐ)，就可(kě)以檢測到這些(xiē)轉錄因子。 

2、為(wèi)獲得(de)最佳的實驗效果，可(kě)适當分裝使用，以盡量避免反複凍融。 

3、PMSF 應現用現加,需自備 PMSF。 

4、裂解蛋白的所有(yǒu)步驟都需在冰上(shàng)或 4℃進行(xíng)。 

5、蛋白酶抑制(zhì)劑均有(yǒu)較高(gāo)的毒性，為(wèi)了您的安全和(hé)健康，請(qǐng)穿實驗服并戴一次性手套操作(zuò)。