産品介紹

BCA（Bicin-choninic Acid）蛋白定量法是目前廣泛應用的蛋白定量方法之一，可(kě)實現對蛋白質進行(xíng)快速、穩定、靈敏的濃度測定。該定量的原理(lǐ)是在堿性介質中，蛋白質可(kě)将 Cu2+還(hái)原成Cu1+的反應，然後使用含有(yǒu) BCA 的獨特試劑，利用比色法檢測 Cu1+，形成一種在 562nm 處有(yǒu)強

吸收值的紫色複合物。通(tōng)過與标準品曲線對比，獲得(de)帶測定蛋白的濃度，具有(yǒu)高(gāo)靈敏度和(hé)高(gāo)選擇性的特點。

産品特色

1、不受蛋白質種類的影(yǐng)響，在 0.02-2mg/ml 濃度範圍內(nèi)蛋白質濃度與吸光值成線性關系

2、對表面活性劑的幹擾影(yǐng)響小(xiǎo)

3、蛋白濃度測定簡單、顯色速度快和(hé)穩定性好

操作(zuò)步驟

1、稀釋 BSA 标準品：用與待測蛋白樣品一緻的稀釋液按下表稀釋 BSA 标準品。

2、配制(zhì) BCA 工作(zuò)液：

a.計(jì)算(suàn) BCA 工作(zuò)液總量：

BCA 工作(zuò)液總量=（BAS 标準品樣本個(gè)數(shù)+未知樣本個(gè)數(shù)）X 複孔數(shù) X 每個(gè)樣本 BCA 工作(zuò)液體(tǐ) 積。

b. 根據計(jì)算(suàn)出的 BCA 工作(zuò)液需要總量，将 BCA-A Solution 和(hé) BCA-B Solution 按照 50:1 的體(tǐ)積比，配制(zhì) BCA 工作(zuò)液，充分混勻。

3、定量檢測：

    ① 按上(shàng)表，将稀釋好的 A-G BSA 标準品和(hé)待測蛋白樣品各 25ul 分别加入到作(zuò)好标記的 96孔微闆孔中，推薦每個(gè)待測的樣本做(zuò) 2-3 個(gè)平行(xíng)反應。(根據樣品的濃度，可(kě)提前稀釋 5 倍 或 10 倍)

    ② 每孔加入 200ul BCA 工作(zuò)液，充分混勻，蓋上(shàng) 96 孔闆蓋，37 度孵育 30 分鍾，冷卻至室溫，在 3-5 分鍾內(nèi)完成檢測。

    ③ 使用分光光度計(jì)或酶标儀測定 562nm 處的每個(gè)樣品及 BSA 标準品的吸光值，同時(shí)做(zuò)好記錄。

    ④ 繪制(zhì)标準曲線，計(jì)算(suàn)樣品中的蛋白濃度。

保存條件

注意事項

1、本産品可(kě)以采用分光光度計(jì)或酶标儀測定蛋白濃度

2、建議每次測定蛋白樣品時(shí)，繪制(zhì)标準曲線，獲得(de)更準确數(shù)據

3、BSA 标準品稀釋液需和(hé)待測樣品的稀釋液一緻

4、BCA法測定蛋白濃度時(shí),吸光值會(huì)随時(shí)間(jiān)的延長不斷加深，并且顯色反應會(huì)因濃度升高(gāo)而加快，如果濃度較低(dī)，适合的較高(gāo)溫度孵育，或适當延長孵育時(shí)間(jiān)。

5、建議去除背景值後的吸光度值讀數(shù)繪制(zhì)标準曲線，由于操作(zuò)誤差導緻标準品讀數(shù)嚴重偏離線性曲線的應舍去。

6、如果得(de)到的蛋白濃度不在檢測範圍內(nèi)，請(qǐng)重新稀釋樣品後再次測定。