目錄号：RE132

試劑盒組成、儲存、穩定性：

本試劑盒在室溫儲存12個(gè)月不影(yǐng)響使用效果。

儲存事項：

1、所有(yǒu)的溶液應該是澄清的，如果環境溫度低(dī)時(shí)溶液可(kě)能形成沉澱，此時(shí)不應該直接使用，可(kě)在37℃水(shuǐ)浴加熱幾分鍾，即可(kě)恢複澄清。

2、避免試劑長時(shí)間(jiān)暴露于空(kōng)氣中産生(shēng)揮發、氧化、PH值變化，各溶液使用後應及時(shí)蓋緊蓋子。

産品介紹：

本試劑盒使用離心吸附柱矽基質膜全部采用進口特制(zhì)吸附膜，柱與柱之間(jiān)吸附量差異極小(xiǎo)，可(kě)重複性好。在高(gāo)鹽條件下RNA 與矽膠吸附膜高(gāo)效、專一地結合，同時(shí)最大(dà)限度除去蛋白質、無機鹽離子和(hé)許多(duō)有(yǒu)機雜質等，在低(dī)鹽條件下，RNA 被洗脫。可(kě)處理(lǐ)的RNA 樣品量可(kě)高(gāo)達50μg。本試劑盒用于從酶反應液（如DNase 處理(lǐ)、蛋白酶處理(lǐ)、RNA 标記等）中純化回收RNA，也可(kě)用于從其它方式提取獲得(de)的RNA的純化。 純化的總RNA沒有(yǒu)蛋白的污染，所得(de)的RNA可(kě)用于Northern blot、Dot blot、mRNA 提取、cDNA合成、引物延伸、差異顯示等。

操作(zuò)步驟：

提示：

    ● 第一次使用前請(qǐng)先在漂洗液RB瓶中加入指定量乙醇，加入後請(qǐng)及時(shí)打鈎标記已加入乙醇，以免多(duō)次加入!

    ● 以下所有(yǒu)步驟均可(kě)以在室溫進行(xíng)，但(dàn)是應該迅速操作(zuò)，減少(shǎo)RNA降解機會(huì)。

1、冰上(shàng)RNA樣品加入 RNase-free water 補足至100μl，加入350μl 結合液RS，混勻。

2、加入250μl 無水(shuǐ)乙醇，混勻，無需離心。

3、上(shàng)一步所得(de)溶液和(hé)可(kě)能有(yǒu)的沉澱一起轉入吸附柱AC中（吸附柱套在收集管CT內(nèi)），4℃ 12,000 rpm 離心45秒(miǎo)，棄掉收集管CT中的廢液，将吸附柱重新套回收集管CT。

如需去除DNA微量殘留，可(kě)在本步驟後進行(xíng)DNA酶柱子上(shàng)直接消化，詳見附錄。

4、加 0.5ml 漂洗液RB（請(qǐng)先檢查是否已加入乙醇），4℃ 12,000 rpm 離心45秒(miǎo)，棄廢液。

5、加 0.5ml 漂洗液RB，4℃ 12,000 rpm 離心45秒(miǎo)，棄廢液。

6、4℃ 13,000 rpm 離心2 分鍾，盡量除去漂洗液, 以免漂洗液中殘留乙醇抑制(zhì)下遊反應。

7、取出吸附柱AC，放入一個(gè)RNase free離心管中，根據預期RNA産量在吸附膜的中間(jiān)部位加50-80μl RNase free water（事先在 65-70℃水(shuǐ)浴中加熱效果更好）， 室溫放置2分鍾，12,000 rpm 離心1分鍾。如果需要較多(duō)RNA，可(kě)将得(de)到的溶液重新加入離心吸附柱中，離心1分鍾,或者另外再加30μl RNase free water，離心一分鍾，合并兩次洗脫液。

洗脫體(tǐ)積越大(dà)，洗脫效率越高(gāo)，如果需要RNA濃度較高(gāo)，可(kě)以适當減少(shǎo)洗脫體(tǐ)積， 但(dàn)是最小(xiǎo)體(tǐ)積最好不少(shǎo)于30μl，體(tǐ)積過小(xiǎo)降低(dī)RNA洗脫效率，減少(shǎo)RNA産量。

附錄：DNase I 柱上(shàng)消化

本試劑盒還(hái)可(kě)以進行(xíng)離心柱上(shàng)DNA酶消化以去除RNA樣品中微量DNA污染, 如果要進行(xíng)嚴格的mRNA表達量分析如熒光定量PCR,可(kě)以購買各種商品化的RNase free DNase直接在離心吸附柱子RA上(shàng)面消化DNA，然後純淨RNA可(kě)以洗脫下來(lái)直接使用。客戶可(kě)根據需要向本公司購買去蛋白液PRS。

以RN3401 DNase I 柱上(shàng)消化試劑盒舉例（貨号：RE128）

DNase I 工作(zuò)液的配制(zhì)：

取45μl DNase I buffer和(hé)5μl RNase free DNase I離心管輕輕吹打混勻成工作(zuò)液（處理(lǐ)多(duō)個(gè)離心柱子要按照比例放大(dà)制(zhì)備工作(zuò)液）。

注：如果殘留DNA過多(duō)導緻消化不完全，可(kě)按比例加大(dà)使用酶量來(lái)提高(gāo)消化效果（如90μl DNase I buffer和(hé)10μl RNase free DNase I）。

操作(zuò)步驟：

1、前面按照正常步驟操作(zuò)，在步驟3完成後按照以下步驟操作(zuò)。

2、向吸附柱AC 中加入350μl去蛋白液PRS，12,000 rpm 離心30 秒(miǎo)，棄廢液，将吸附柱放回收集管CT中。

3、向吸附柱AC 中央加入50μl的DNase I 工作(zuò)液，室溫（20-30℃）放置15 分鍾。注意直接将工作(zuò)液滴在膜中央上(shàng)，不要讓工作(zuò)液滴在O型圈或是離心柱管壁上(shàng)。

4、向吸附柱AC 中加入350μl去蛋白液PRS， 12,000 rpm 離心30-60 秒(miǎo)，棄廢液，将吸附柱放回收集管CT中。

5、接漂洗液RB步驟等後續步驟。如果是其它公司試劑盒，則接最後的一個(gè)漂洗液漂洗等後續步驟。