1/适用範圍：

适用于快速提取通(tōng)用植物RNA。

2/試劑盒組成、儲存、穩定性：

本試劑盒按照各成份指示儲存12個(gè)月不影(yǐng)響使用效果。

3/儲存事項：

1、常溫成份不合适的儲存于低(dī)溫（4℃或者－20℃）會(huì)造成溶液沉澱，影(yǐng)響使用效果，因此運輸和(hé)儲存均在室溫下（15℃－25℃）進行(xíng)。

2、避免試劑長時(shí)間(jiān)暴露于空(kōng)氣中産生(shēng)揮發、氧化、PH值變化，各溶液使用後應及時(shí)蓋緊蓋子。

4/産品介紹：

獨特的裂解液迅速裂解細胞和(hé)滅活細胞RNA酶，，然後用乙醇調節結合條件後，RNA在高(gāo)離序鹽狀态下選擇性吸附于離心柱內(nèi)矽基質膜，DNase直接在柱上(shàng)消化殘留DNA，再通(tōng)過一系列快速的漂洗－離心的步驟, 去蛋白液和(hé)漂洗液将細胞代謝物，蛋白等雜質去除， 最後低(dī)鹽的RNase free H20将純淨RNA從矽基質膜上(shàng)洗脫。

5/産品特點：

1、完全不使用有(yǒu)毒的β-巯基乙醇/苯酚/氯仿，也不需要乙醇沉澱等步驟。

2、簡捷，單個(gè)樣品操作(zuò)一般可(kě)在40分鍾內(nèi)完成，世界上(shàng)最簡單快速的試劑盒。

3、配套DNase I 柱上(shàng)消化，得(de)到的RNA不殘留DNase消化，可(kě)直接用于反轉錄 熒光定量PCR、二代測序、芯片、RACE等實驗。

4、世界領先，是同類産品中适應性最廣泛的試劑盒，可(kě)以提取包括水(shuǐ)稻、玉米、小(xiǎo)麥、拟南芥、番茄和(hé)一般多(duō)糖多(duō)酚植物。

5、多(duō)次柱漂洗确保高(gāo)純度，OD260/OD280典型的比值達2.0～2.2，無DNA殘留，可(kě)直接用于熒光定量PCR、RT-PCR、芯片、二代測序、Northern-blot等各種實驗。

6/注意事項

1、所有(yǒu)的離心步驟均在室溫完成，使用轉速可(kě)以達到13,000 rpm的傳統台式離心機。

2、需要自備乙醇，研缽(可(kě)選)。

3、裂解液RPA和(hé)去蛋白液PRS中含有(yǒu)刺激性化合物，操作(zuò)時(shí)戴乳膠手套，避免沾染皮膚，眼睛和(hé)衣服。若沾染皮膚、眼睛時(shí)，要用大(dà)量清水(shuǐ)或者生(shēng)理(lǐ)鹽水(shuǐ)沖洗。 

7/操作(zuò)步驟：（實驗前請(qǐng)先閱讀注意事項）

提示：第一次使用前請(qǐng)先在漂洗液RB瓶加入指定量無水(shuǐ)乙醇!

1、直接研磨法（推薦）:

a.  新鮮植物組織稱重後取100mg迅速剪成小(xiǎo)塊放入研缽（冰凍保存或液氮保存樣品可(kě)直接稱重後取100mg放入研缽）， 加1 ml 裂解液RPA室溫下充分研磨成勻漿，注意應該迅速研磨讓組織和(hé)裂解液RPA立刻充分接觸以抑制(zhì)RNA酶活性。

b.  将裂解物轉入離心管，劇(jù)烈搖晃振蕩15秒(miǎo)，13,000rpm離心5-10分鍾，沉澱不能裂解的碎片。

c.  取480μl裂解物上(shàng)清（在不超過RNA吸附柱能力的情況下可(kě)以取更多(duō)或者全部上(shàng)清，這樣可(kě)以提高(gāo)産量）轉到一個(gè)新離心管。加入上(shàng)清體(tǐ)積一半的無水(shuǐ)乙醇(0.5體(tǐ)積)，此時(shí)可(kě)能出現沉澱，但(dàn)是不影(yǐng)響提取過程，立即吹打混勻，不要離心。

d.  立刻接操作(zuò)步驟的步驟3。

2、液氮研磨法:

a.  取500μl裂解液RPA，轉入1.5ml離心管中。

b.  液氮中研磨适量植物組織成細粉後，取50mg細粉轉入上(shàng)述裝有(yǒu)裂解液RPA的離心管, 立即用手劇(jù)烈振蕩20秒(miǎo)，充分裂解。

c.  用吸頭吹打混勻幫助裂解或者劇(jù)烈渦旋震蕩直到得(de)到滿意勻漿結果(或者電(diàn)動勻漿30秒(miǎo))，可(kě)以剪切DNA，降低(dī)粘稠度和(hé)提高(gāo)産量。

d.  将裂解物13,000 rpm離心5-10分鍾，沉澱不能裂解的碎片。

e.  取裂解物上(shàng)清（在不超過RNA吸附柱能力的情況下可(kě)以取更多(duō)的上(shàng)清，這樣可(kě)以提高(gāo)産量）轉到一個(gè)新離心管。加入上(shàng)清體(tǐ)積一半的無水(shuǐ)乙醇(0.5體(tǐ)積)，此時(shí)可(kě)能出現沉澱，但(dàn)是不影(yǐng)響提取過程，立即吹打混勻，不要離心。

f.  立刻接操作(zuò)步驟的步驟3。

注意：以上(shàng)液氮研磨法用戶可(kě)以根據需要加倍處理(lǐ)，可(kě)以提高(gāo)産量。也就是使用1ml的裂解液RPA和(hé)100mg的樣品。

3、将混合物(每次小(xiǎo)于720μl，多(duō)可(kě)以分兩次加入)加入一個(gè)吸附柱AC中，（吸附柱AC放入收集管CT中）13,000 rpm離心2分鍾，棄掉廢液。

确保離心後液體(tǐ)全部濾過去，膜上(shàng)沒有(yǒu)殘留，如有(yǒu)必要，可(kě)以加大(dà)離心力和(hé)離心時(shí)間(jiān)。

4、加350μl 去蛋白液PRS，室溫放置1分鍾，13,000rpm 離心30秒(miǎo)，棄掉廢液。

5、DNase I工作(zuò)液配制(zhì)：取45μl DNase I buffer和(hé)5μl RNase free DNase I在離心管輕輕吹打混勻成工作(zuò)液（處理(lǐ)多(duō)個(gè)離心柱子要按照比例放大(dà)制(zhì)備工作(zuò)液）。

6、向吸附柱AC 中央加入50μl 的DNase I 工作(zuò)液，室溫（20-30℃）放置15 分鍾。注意直接将工作(zuò)液滴在膜中央上(shàng)，不要讓工作(zuò)液滴在O型圈或是離心柱管壁上(shàng)。

7、向吸附柱AC 中加入350μl去蛋白液PRS， 12,000 rpm 離心30秒(miǎo)，棄廢液，将吸附柱AC放回收集管CT中。

8、加入500μl漂洗液RB（請(qǐng)先檢查是否已加入無水(shuǐ)乙醇!），13,000 rpm 離心30秒(miǎo)，棄掉廢液。加入500μl漂洗液RB，重複一遍。

9、将吸附柱AC放回空(kōng)收集管CT中，13,000 rpm離心2分鍾，盡量除去漂洗液， 以免漂洗液中殘留乙醇抑制(zhì)下遊反應。

10、取出吸附柱AC，放入一個(gè)RNase free離心管中，根據預期RNA産量在吸附膜的中間(jiān)部位加30-50μl RNase free water（事先在70-90℃水(shuǐ)浴中加熱可(kě)提高(gāo)産量）， 室溫放置1分鍾，12,000 rpm 離心1分鍾。

11、如果預期RNA産量>30μg，加30-50μl RNase free water重複步驟10，合并兩次洗液，或使用第一次的洗脫液加回到吸附柱重複步驟一遍(如果需要RNA濃度高(gāo))。

洗脫兩遍的RNA洗脫液RNA濃度高(gāo),分兩次洗脫合并洗脫液的RNA産量比前者高(gāo)15–30%，但(dàn)是濃度要低(dī)，用戶根據需要選擇。

注意：如果不需要做(zuò)熒光定量PCR，僅僅做(zuò)普通(tōng)的反轉錄，克隆基因片段，可(kě)以省略DNA酶柱上(shàng)消化的步驟，具體(tǐ)就是第4步驟的“加350μl 去蛋白液PRS”改成“加700μl 去蛋白液PRS”，同時(shí)省略步驟5，6，7。