21/适用範圍：

适用于快速提取多(duō)糖多(duō)酚植物組織細胞總RNA。

2/試劑盒組成、儲存、穩定性：

本試劑盒在室溫儲存12個(gè)月不影(yǐng)響使用效果。

3/儲存事項：

1、不合适的儲存于低(dī)溫（4℃或者－20℃）會(huì)造成溶液沉澱，影(yǐng)響使用效果，因此運輸和(hé)儲存均在室溫下（15℃－25℃）進行(xíng)。

2、避免試劑長時(shí)間(jiān)暴露于空(kōng)氣中産生(shēng)揮發、氧化、PH值變化，各溶液使用後應及時(shí)蓋緊蓋子。

4/産品介紹：

獨特的裂解液迅速裂解細胞和(hé)滅活細胞RNA酶，植物RNA助提劑PLA幫助結合多(duō)糖多(duō)酚并通(tōng)過離心去除，然後用乙醇調節結合條件後，RNA在高(gāo)離序鹽狀态下選擇性吸附于離心柱內(nèi)矽基質膜，再通(tōng)過一系列快速的漂洗－離心的步驟，去蛋白液和(hé)漂洗液将細胞代謝物，蛋白等雜質去除， 最後低(dī)鹽的RNase free H20将純淨RNA從矽基質膜上(shàng)洗脫。

5/産品特點：

1、完全不使用有(yǒu)毒的苯酚，氯仿等試劑，也不需要乙醇沉澱等步驟。

2、簡捷，單個(gè)樣品操作(zuò)一般可(kě)在25分鍾內(nèi)完成，世界上(shàng)最簡單快速的試劑盒。

3、獨有(yǒu)的植物RNA助提劑PLA可(kě)以有(yǒu)效結合多(duō)糖多(duō)酚，提高(gāo)清除效果。

4、世界領先适應性極其廣泛，可(kě)以提取包括棉花(huā)、松針、冬青樹(shù)葉、葡萄葉片等100多(duō)種國內(nèi)外試劑盒提取失敗的樣品。

5、多(duō)次柱漂洗确保高(gāo)純度，OD260/OD280典型的比值達2.0～2.2，基本無DNA殘留，可(kě)用于RT-PCR，Northern-blot和(hé)各種實驗。

6/注意事項

1、所有(yǒu)的離心步驟均在室溫完成，使用轉速可(kě)以達到13,000 rpm的傳統台式離心機。

2、需要自備乙醇，研缽(可(kě)選)。

3、裂解液LBT和(hé)去蛋白液PRS中含有(yǒu)刺激性化合物，操作(zuò)時(shí)戴乳膠手套，避免沾染皮膚，眼睛和(hé)衣服。若沾染皮膚、眼睛時(shí)，要用大(dà)量清水(shuǐ)或者生(shēng)理(lǐ)鹽水(shuǐ)沖洗。

4、關于DNA 的微量殘留：

一般說來(lái)任何總RNA提取試劑在提取過程中無法完全避免DNA的微量殘留，本公司的GenePure系列RNA提取産品，由于采取了本公司獨特的緩沖體(tǐ)系和(hé)選擇了特殊吸附能力的吸附膜已經清除了絕大(dà)部分的DNA殘留，在大(dà)多(duō)數(shù)RT-PCR 擴增過程中極其微量的DNA殘留影(yǐng)響不是很(hěn)大(dà)，如果要進行(xíng)嚴格的mRNA表達量分析如熒光定量PCR，我們建議在進行(xíng)模闆和(hé)引物的選擇時(shí)：

4. ① 選用跨內(nèi)含子的引物，以穿過mRNA中的連接區(qū)，這樣DNA就不能作(zuò)為(wèi)模闆參與擴增反應。
5. ② 選擇基因組DNA和(hé)cDNA上(shàng)擴增的産物大(dà)小(xiǎo)不一樣的引物對。
6. ③ 将RNA提取物用RNase-free的DNase I 處理(lǐ)。本試劑盒還(hái)可(kě)以用于DNase I處理(lǐ)後的RNA清潔(cleanup)，請(qǐng)聯系我們索取具體(tǐ)操作(zuò)說明(míng)書(shū)。
7. ④ 在步驟去蛋白液PRS漂洗前，直接在吸附柱AC上(shàng)進行(xíng)DNase I柱上(shàng)消化處理(lǐ)。請(qǐng)聯系我們索取具體(tǐ)操作(zuò)說明(míng)書(shū)。

5、關于複雜植物樣品提取殘留較多(duō)DNA的情況有(yǒu)兩個(gè)選項：

1. ① 在步驟去蛋白液PRS漂洗前，直接在吸附柱AC上(shàng)進行(xíng)DNase I柱上(shàng)消化處理(lǐ)。購買DNA酶柱上(shàng)消化試劑盒(貨号：RE128)前可(kě)先索取具體(tǐ)操作(zuò)說明(míng)書(shū)。
2. ② 部分較複雜的植物樣品提取時(shí)，可(kě)能殘留較多(duō)DNA，可(kě)以嘗試本公司的RE121 GenePure Plus植物RNA提取試劑盒。RE121在RE120 GenePure植物RNA提取試劑盒基礎上(shàng)，又獨家(jiā)研發成功基因組DNA清除柱技(jì)術(shù)可(kě)以有(yǒu)效清除DNA殘留，在大(dà)多(duō)數(shù)情況下，可(kě)以将DNA殘留清除到紫外下觀測不可(kě)見。

6、關于特别複雜難提取植物樣品提取失敗或者産量低(dī)的情況：

一些(xiē)特别複雜的植物樣品提取，如葡萄果實，藍(lán)靛果果實等，RE120 裂解液LBT無法提取，需選擇RE122 GenePure Plus複雜植物RNA提取試劑盒。一些(xiē)樣品産量較低(dī)，也可(kě)以嘗試RE122 GenePure Plus複雜植物RNA提取試劑盒。RE122 配有(yǒu)強力裂解液CLB選項，在很(hěn)多(duō)情況下，可(kě)以提取複雜樣品或者明(míng)顯提高(gāo)産量（詳情請(qǐng)看RE122說明(míng)書(shū)）。

7/操作(zuò)步驟：（實驗前請(qǐng)先閱讀注意事項）

提示：第一次使用前請(qǐng)先在漂洗液RB瓶加入指定量無水(shuǐ)乙醇!

1、直接研磨法（推薦）:

a.  新鮮植物組織稱重後取100mg迅速剪成小(xiǎo)塊放入研缽（冰凍保存或者液氮保存樣品可(kě)直接稱重後取100mg放入研缽）， 加入10體(tǐ)積（1ml）LBT和(hé)1體(tǐ)積（100μl） PLA 室溫下充分研磨成勻漿，注意應該迅速研磨讓組織和(hé)裂解液LBT立刻充分接觸以抑制(zhì)RNA酶活性。

注：PLA是提取多(duō)糖多(duō)酚次級代謝産物色素含量豐富的困難樣品不可(kě)缺少(shǎo)成分。

b.  将裂解物轉入離心管，劇(jù)烈搖晃振蕩15秒(miǎo)，13,000rpm離心5-10分鍾，沉澱不能裂解的碎片和(hé)結合有(yǒu)多(duō)糖多(duō)酚的PLA。

c.  取480μl裂解物上(shàng)清（在不超過RNA吸附柱能力的情況下可(kě)以取更多(duō)或者全部上(shàng)清，這樣可(kě)以提高(gāo)産量）轉到一個(gè)新離心管。加入上(shàng)清體(tǐ)積一半的無水(shuǐ)乙醇(0.5體(tǐ)積)，此時(shí)可(kě)能出現沉澱，但(dàn)是不影(yǐng)響提取過程，立即吹打混勻，不要離心。

d.  立刻接操作(zuò)步驟的步驟3。

2、液氮研磨法（提取複雜，易降解樣品時(shí)推薦此法）:

a.  取500μl裂解液LBT，轉入1.5ml離心管中，加入50μl PLA混勻備用。

b.  液氮中研磨适量植物組織成細粉後，取50mg細粉轉入上(shàng)述裝有(yǒu)裂解液LBT和(hé)PLA的離心管，立即用手劇(jù)烈振蕩20秒(miǎo)，充分裂解。

c.   用吸頭吹打混勻幫助裂解或者劇(jù)烈渦旋震蕩直到得(de)到滿意勻漿結果(或者電(diàn)動勻漿30秒(miǎo))，可(kě)以剪切DNA，降低(dī)粘稠度和(hé)提高(gāo)産量。

d.  将裂解物13,000 rpm離心5-10分鍾，沉澱不能裂解的碎片和(hé)結合有(yǒu)多(duō)糖多(duō)酚的PLA。

e.  取裂解物上(shàng)清（在不超過RNA吸附柱能力的情況下可(kě)以取更多(duō)的上(shàng)清，這樣可(kě)以提高(gāo)産量）轉到一個(gè)新離心管。加入上(shàng)清體(tǐ)積一半的無水(shuǐ)乙醇(0.5體(tǐ)積)，此時(shí)可(kě)能出現沉澱，但(dàn)是不影(yǐng)響提取過程，立即吹打混勻，不要離心。

f.  立刻接操作(zuò)步驟的步驟3。

注意：以上(shàng)液氮研磨法用戶可(kě)以根據需要加倍處理(lǐ)，可(kě)以提高(gāo)産量。也就是使用1ml的裂解液LBT和(hé)100μl PLA和(hé)100mg的樣品。

3、将混合物(每次小(xiǎo)于720μl，多(duō)可(kě)以分兩次加入)加入一個(gè)吸附柱AC中，（吸附柱AC放入收集管CT中）13,000 rpm離心2分鍾，棄掉廢液。

确保離心後液體(tǐ)全部濾過去，膜上(shàng)沒有(yǒu)殘留，如有(yǒu)必要，可(kě)以加大(dà)離心力和(hé)離心時(shí)間(jiān)。

4、加700μl 去蛋白液PRS，室溫放置1分鍾，13,000rpm 離心30秒(miǎo)，棄掉廢液。

5、加入500μl漂洗液RB（請(qǐng)先檢查是否已加入無水(shuǐ)乙醇!），13,000 rpm 離心30秒(miǎo)，棄掉廢液。加入500μl漂洗液RB，重複一遍。

6、将吸附柱AC放回空(kōng)收集管CT中，13,000 rpm離心2分鍾，盡量除去漂洗液，以免漂洗液中殘留乙醇抑制(zhì)下遊反應。

7、取出吸附柱AC，放入一個(gè)RNase free離心管中，根據預期RNA産量在吸附膜的中間(jiān)部位加30-50μl RNase free water（事先在70-90℃水(shuǐ)浴中加熱可(kě)提高(gāo)産量）， 室溫放置1分鍾，12,000 rpm 離心1分鍾。

8、如果預期RNA産量>30μg，加30-50μl RNase free water重複步驟7，合并兩次洗液，或者使用第一次的洗脫液加回到吸附柱重複步驟一遍(如果需要RNA濃度高(gāo))。

洗脫兩遍的RNA洗脫液RNA濃度高(gāo)，分兩次洗脫合并洗脫液的RNA産量比前者高(gāo)15–30%，但(dàn)是濃度要低(dī)，用戶根據需要選擇。