1. 适用範圍
适用于快速提取植物組織總蛋白,可(kě)以用于蛋白電(diàn)泳、Westernblot 等下遊實驗。
2. 産品規格
存儲條件:室溫。
3. 産品介紹
1、稱取50-100mg 的植物組織于 1.5mL 離心管中,加入 200μL 的裂解液PBT,用研磨棒将植物組織磨碎混勻,冰上(shàng)放置 10 分鍾;
2、将過濾柱放入收集管中,将步驟 1 中的勻漿液加到過濾柱中,約13000rpm 離心 5 分鍾,收集濾液;
3、向濾液中加入等體(tǐ)積的溶液 PB1,漩渦震蕩 20 秒(miǎo),13000rpm 離心5分鍾,溶液分層,去掉上(shàng)層溶液;
4、加入1mL 的預冷試 PB2,-20℃放置 10-20 分鍾,如果植物組織過少(shǎo),可(kě)以延長過夜放置;13000rpm 離心10 分鍾,棄上(shàng)清;
5、 加入500μL 預冷試劑四,渦旋混勻,13000rpm 離心5 分鍾,棄上(shàng)清;
6、重複步驟 5;
7、室溫開(kāi)蓋靜置 5-10 分鍾,風幹,沉澱即為(wèi)蛋白幹粉;
8、用合适的緩沖液溶解沉澱,推薦使用 Tris-Cl(pH8.8),或者 1×SDS-PAGE上(shàng)樣緩沖液直接溶解進行(xíng)電(diàn)泳測試。
注:由于各種蛋白的等電(diàn)點不同,所以溶解度也不同。如果想全部溶解需要使用PH 較高(gāo)的溶液溶解或者使用帶有(yǒu)去污劑(巯基乙醇、DTT 或者SDS) 的溶液溶解。