組成
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RE128-01
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DNase Buffer
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1.25 ml x 2
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RNase free DNase I
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0.25 ml
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去蛋白液PRS
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40 ml
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包裝量:
産品儲存:
DNase Buffer -20 ℃保存, 去蛋白液PRS常溫或者4 ℃保存,RNase free DNase-20 ℃保存,避免反複凍融。
産品介紹:
任何總RNA提取試劑在提取過程中無法完全避免DNA的微量殘留,本公司的GenePure系列RNA提取産品,由于采取了本公司獨特的緩沖體(tǐ)系和(hé)特殊矽膠吸附膜,可(kě)以去除絕大(dà)多(duō)數(shù)的DNA污染,所以一般不用進行(xíng)DNase I 消化。但(dàn)是對于一些(xiē)敏感的下遊實驗,需要去除微量的DNA殘留,可(kě)以購買本公司DNase I柱上(shàng)消化試劑盒(RNase free),直接在離心吸附柱上(shàng)面消化殘留的DNA,然後純淨RNA可(kě)以洗脫下來(lái)直接使用。本産品兼容所有(yǒu)矽膠膜離心柱式RNA提取試劑盒。
産品特點:
1、簡單快速,條件經過優化,一般15分鍾可(kě)以消化清除矽膠膜上(shàng)殘留DNA。
2、确保RNase free, 可(kě)以保證RNA分子完整性。
3、兼容性廣,可(kě)整合進所有(yǒu)矽膠膜離心柱式RNA提取試劑盒柱上(shàng)消化,不需要提取到總RNA後再單獨去除裏面的殘留DNA。
注意事項:
DNase是非常敏感,易物理(lǐ)損壞變性喪失活性,所以不要漩渦混勻DNase I和(hé)工作(zuò)液。輕輕吹打或者上(shàng)下颠倒混勻混合液。每次在抽提RNA抽提前配置新鮮的工作(zuò)液。DNase I buffer是和(hé)RNase-free DNase I配套專門(mén)用于柱上(shàng)消化,一般的10 x DNase buffer 并不能用于膜上(shàng)的DNase 消化,不能替代。
操作(zuò)步驟:
1、按照正常RNA提取步驟操作(zuò),裂解混合物過柱離心完全後(RNA包括殘留DNA吸附到離心柱矽膠膜上(shàng)),加入去蛋白液PRS步驟前按照以下步驟操作(zuò)。
2、取一個(gè)新的1.5ml離心管,加入45μl DNase I buffer和(hé)5μl RNase free DNase I,輕輕吹打混勻成DNase I工作(zuò)液(處理(lǐ)多(duō)個(gè)離心柱子要按照比例放大(dà)制(zhì)備工作(zuò)液)。置冰上(shàng)備用。
注:如果殘留DNA過多(duō)導緻消化不完全,可(kě)按比例加大(dà)使用酶量來(lái)提高(gāo)消化效果(如90μl DNase I buffer和(hé)10μl RNase free DNase I)。
3、向吸附柱AC 中加入350μl去蛋白液PRS,12,000 rpm 離心30 秒(miǎo),棄廢液,将吸附柱放回收集管中。
4、向吸附柱AC 中央加入50μl 的DNase I 工作(zuò)液,室溫(20-30℃)放置15 分鍾。注意直接将工作(zuò)液滴在膜中央上(shàng),不要讓工作(zuò)液滴在O型圈或是離心柱管壁上(shàng)。
5、向吸附柱AC 中加入350μl去蛋白液PRS, 12,000 rpm 離心30-60 秒(miǎo),棄廢液,将吸附柱放回收集管中。
6、接漂洗液RB步驟等後續步驟。如果是其它公司試劑盒,則接最後的一個(gè)漂洗液漂洗等後續步驟。