包裝量:
組成
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RE135-01
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RNase Inhibitor
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50μl
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産品儲存:-20 ℃保存,避免起泡,避免劇(jù)烈振蕩或攪拌。
産品介紹:
本制(zhì)品是經過大(dà)腸杆菌表達的重組蛋白,與RNase A形成1:1複合體(tǐ),對RNase 表現高(gāo)度的非競争性抑制(zhì)(Ki=3×10-10 M)。該反應是可(kě)逆的,通(tōng)過尿素及疏基類試劑能夠解離複合體(tǐ),使RNase 複活而抑制(zhì)劑不可(kě)逆失活。本品屬蛋白質性質,與其它競争性抑制(zhì)劑(核酸類、無機磷酸類)不同,可(kě)以很(hěn)容易地通(tōng)過苯酚處理(lǐ)将其從反應體(tǐ)系中除去。
活性定義:抑制(zhì)5 ng RNase A活性的50%所需要的酶量定義為(wèi)1個(gè)活性單位(U)。
第一鏈cDNA合成(以20 μl反應體(tǐ)系為(wèi)例)
1、加入
Components
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Volume
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Total RNA/mRNA
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50 ng-5 μg/5-500 ng
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Oligo(dT)18(0.5 μg /μl)or
Random Primer(0.1 μg/μl) or
GSP(Gene Specific Primer)
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1 μl
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1 μl
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2 pmol
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dNTP Mixture (10 mM each)
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1 μl
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5× RT Buffer
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4 μl
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RNase Inhibitor(40 units/μl)
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0.5-1 μl
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TUREscript Hˉ RTase
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1 μl
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RNase free H2O to final volume
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20 μl
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2、輕輕混勻
如用Oligo(dT)18或基因特異引物(GSP),42℃孵育50min。
如用Random Primer,25℃孵育10 min,42℃孵育50 min。
3、70℃加熱5 min失活TUREscript Hˉ RTase。
RT-PCR
反轉錄所得(de)的cDNA可(kě)直接用于PCR反應或儲存于-20°C。