試劑盒組成、儲存、穩定性:
試劑盒組成
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保存
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50次(RE130-01)
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裂解液VLB
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室溫
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20 ml
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Poly Carrier
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-20℃
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200μl
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去蛋白液PR
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室溫
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25 ml
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漂洗液RB
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室溫
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10 ml
第一次使用前按說明(míng)加指定量乙醇
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RNase-free H2O
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室溫
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10 ml
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RNase-free
吸附柱AC和(hé)收集管CT
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室溫
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50套
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室溫儲存12個(gè)月不影(yǐng)響使用效果, 各溶液使用後應及時(shí)蓋緊蓋子。
産品介紹:
采用特異性結合病毒DNA/RNA 的離心吸附柱和(hé)獨特的緩沖液系統,病毒DNA/RNA提取試劑盒适合于從無細胞體(tǐ)液,包括血漿、血清、腹水(shuǐ)、培養細胞上(shàng)清液、腦(nǎo)脊髓液及尿液等中快速提取高(gāo)純的病毒DNA/RNA。該産品可(kě)以滿足絕大(dà)多(duō)數(shù)的病毒RNA/DNA的同時(shí)提取要求, 如病毒RNA:HCV(丙肝病毒),HIV(艾滋病毒),和(hé)HTLV(人(rén)類嗜T淋巴細胞病毒); 病毒DNA:HBV(乙肝病毒)和(hé)CMV(巨細胞病毒)等等。病毒裂解後,DNA/RNA後在高(gāo)離序鹽狀态下選擇性吸附于離心柱內(nèi)矽基質膜(特别配備了Poly Carrier可(kě)以從體(tǐ)系中輕松捕獲微量核酸),再通(tōng)過一系列快速的漂洗-離心的步驟,将鹽、細胞代謝物、蛋白等雜質去除,最後低(dī)鹽的洗脫緩沖液将純淨的病毒DNA/RNA從矽基質膜上(shàng)洗脫。純化後的病毒核酸無雜質和(hé)PCR抑制(zhì)劑,可(kě)直接适用于PCR/RT-PCR分析。
産品特點:
1、不需要使用有(yǒu)毒的苯酚等試劑,也不需要乙醇沉澱等步驟。
2、節省時(shí)間(jiān),簡捷,單個(gè)樣品操作(zuò)一般可(kě)在20分鍾內(nèi)完成。
3、多(duō)次柱漂洗确保高(gāo)純度,提取的病毒DNA/RNA 純度高(gāo),質量穩定可(kě)靠,可(kě)适用于各種常規操作(zuò),包括PCR/RT-PCR、酶切、測序、Southern 雜交等。
注意事項:
1、所有(yǒu)的離心步驟均在室溫完成,使用轉速可(kě)以達到13,000rpm的傳統台式離心機。
2、開(kāi)始實驗前将需要的水(shuǐ)浴先預熱到特定溫度備用。
3、裂解液VLB和(hé)去蛋白液PR中含有(yǒu)刺激性化合物,操作(zuò)時(shí)戴乳膠手套,避免沾染皮膚、眼睛和(hé)衣服。若沾染皮膚、眼睛時(shí),要用大(dà)量清水(shuǐ)或者生(shēng)理(lǐ)鹽水(shuǐ)沖洗。
4、Poly Carrier:
Poly Carrier使用方法:如果起始處理(lǐ)量很(hěn)少(shǎo),我們推薦使用Poly Carrier,如果預期有(yǒu)較大(dà)量核酸産量,用戶可(kě)以根據需要選擇是否加入Poly Carrier。使用時(shí)在每個(gè)樣品提取所需裂解液VLB中加入4μl Poly Carrier儲存溶液, 将裂解液VLB與Poly Carrier溶液充分颠倒混勻即可(kě)(裂解液VLB容易起泡沫,請(qǐng)勿使用渦旋振蕩混勻)。也可(kě)根據樣品數(shù)量,在總共需要的裂解液VLB中加入總共需要的Poly Carrier混勻備用。混合液在室溫24小(xiǎo)時(shí)內(nèi)穩定。
操作(zuò)步驟:(實驗前請(qǐng)先閱讀注意事項)
提示:第一次使用前請(qǐng)先在10ml漂洗液RB中加入40ml無水(shuǐ)乙醇,充分混勻,加入後請(qǐng)及時(shí)在方框打鈎标記已加入乙醇,以免多(duō)次加入!
1、将200μl血清等體(tǐ)液(需回複到室溫,不足可(kě)用0.9% NaCl或者PBS補足)轉入1.5ml離心管,加入400μl 裂解液VLB, 立刻渦旋振蕩充分混勻。
如果處理(lǐ)樣品量小(xiǎo)或者病毒預期濃度較低(dī),建議在400μl裂解液VLB中加入4μl Poly Carrier儲存溶液。
2、室溫(15-25℃)放置10分鍾,每隔5分鍾,振蕩混勻一次。
3、加入450μl無水(shuǐ)乙醇,立刻渦旋振蕩充分混勻。
如果周圍環境高(gāo)于25℃,乙醇需要冰上(shàng)預冷後再加入。
4、将上(shàng)述混合物加入一個(gè)吸附柱AC中,(吸附柱AC放入收集管CT中)13,000rpm離心30-60秒(miǎo),倒掉收集管CT中的廢液。
如果總體(tǐ)積超過750μl,可(kě)分兩次将溶液加入同一個(gè)吸附柱AC中。
5、加500μl去蛋白液PR,12,000rpm離心30秒(miǎo),棄廢液。
6、加入500μl漂洗液RB(請(qǐng)先檢查是否已加入無水(shuǐ)乙醇!),12,000rpm 離心30秒(miǎo),棄廢液,加入500μl漂洗液RB,重複一遍。
7、将吸附柱AC放回空(kōng)收集管CT中,13,000rpm離心2分鍾,盡量除去漂洗液, 以免漂洗液中殘留乙醇抑制(zhì)下遊反應。
8、取出吸附柱AC,放入一個(gè)RNase free的離心管中,在吸附膜的中間(jiān)部位加30-50μl RNase free H20(事先在 65-70℃水(shuǐ)浴中加熱效果更好), 室溫放置1分鍾,12,000rpm 離心1分鍾。如果想得(de)到較多(duō)量的DNA/RNA,可(kě)将得(de)到的溶液重新加入離心吸附柱中,12,000rpm離心1分鍾。
洗脫體(tǐ)積越大(dà),洗脫效率越高(gāo)。如果需要DNA/RNA濃度較高(gāo),可(kě)以适當減少(shǎo)洗脫體(tǐ)積, 但(dàn)是最小(xiǎo)體(tǐ)積不應少(shǎo)于20μl,體(tǐ)積過小(xiǎo)降低(dī)洗脫效率,減少(shǎo)DNA/RNA産量。
9、病毒DNA可(kě)以存放在2-8℃,如果要長時(shí)間(jiān)存放,可(kě)以放置在-20℃。病毒RNA建議最好立刻使用,否則立刻短(duǎn)期放置在-70℃備用。