酵母基因組DNA提取試劑盒 (溶液型)
DE120
50次、100次
适用于快速提取各種酵母基因組DNA
規格 價格
50次 ¥628
100次 ¥1020

1/适用範圍:

适用于快速提取各種酵母基因組DNA。

 

 

2/試劑盒組成、儲存、穩定性:

試劑盒組成

保存

50次

(DE120-01)

100次

(DE120-02)

酵母裂解液YS

室溫

15 ml

30 ml

蛋白沉澱液PPS

室溫

5 ml

10 ml

DNA溶解液DS

室溫

5 ml

5 ml

                               本試劑盒在室溫儲存12個(gè)月不影(yǐng)響使用效果。

 

 

3/儲存事項:

1、環境溫度低(dī)時(shí)酵母裂解液YS中某些(xiē)去污劑成份會(huì)析出出現渾濁或者沉澱,可(kě)在37℃水(shuǐ)浴加熱幾分鍾,輕輕旋搖,即可(kě)恢複澄清,不要劇(jù)烈搖晃,以免形成過量的泡沫。

2、蛋白沉澱液PPS可(kě)能出現析出和(hé)沉澱,可(kě)以在37℃水(shuǐ)浴幾分鍾幫助重新溶解,如果不能完全溶解,也不影(yǐng)響使用效果,直接取用上(shàng)層溶液即可(kě)。

3、避免試劑長時(shí)間(jiān)暴露于空(kōng)氣中産生(shēng)揮發、氧化、pH值變化,各溶液使用後應及時(shí)蓋緊蓋子。

 

 

4/産品介紹:

本試劑盒用于快速的從酵母中提取基因組DNA。在針對酵母細胞特點配制(zhì)的酵母裂解液作(zuò)用下, 酵母細胞被裂解釋放出基因組DNA,然後蛋白沉澱液選擇性沉澱去除蛋白,最後純淨的基因組DNA通(tōng)過異丙醇沉澱并重溶解于DNA溶解液。

 

 

5/産品特點:

1、不需要使用有(yǒu)毒的苯酚、氯仿等試劑。

2、快速,簡捷,整個(gè)過程可(kě)在1個(gè)小(xiǎo)時(shí)內(nèi)完成。

3、結果穩定,産量高(gāo)(比離心柱型的産量高(gāo)一倍以上(shàng)),OD260/OD280典型的比值達1.7~1.9,長度可(kě)達50Kb-150kb,可(kě)直接用于PCR,Southern-blot和(hé)各種酶切反應以及文庫構建。

 

 

6/操作(zuò)步驟:(實驗前請(qǐng)先閱讀注意事項)

1、吸取1.5ml 酵母培養物到一個(gè)1.5ml離心管; 12,000rpm離心2分鍾,盡可(kě)能棄上(shàng)清,必要時(shí)候可(kě)以用槍吸去。

2、高(gāo)速渦旋振蕩,打散重懸酵母細胞團。

3、加入300μl酵母裂解液YS,渦旋振蕩混勻,或者用1ml的槍頭反複吹打混勻。

酵母細胞的重懸分散對下一步裂解非常重要,必須充分分散重懸

4、将裂解物放置在70℃水(shuǐ)浴15-30分鍾。

如果産量低(dī),可(kě)以适當提高(gāo)水(shuǐ)浴溫度和(hé)延長水(shuǐ)浴時(shí)間(jiān),中間(jiān)可(kě)以渦旋振蕩混勻幾次幫助裂解。

5、冰上(shàng)至少(shǎo)5分鍾使回複到室溫。

6、在回複到室溫的裂解物內(nèi)加入100μl蛋白沉澱液PPS後,在渦旋振蕩器(qì)上(shàng)高(gāo)速連續振蕩混勻20秒(miǎo)。混勻後可(kě)能見到一些(xiē)小(xiǎo)的蛋白團塊。冰浴5分鍾

7、13,000rpm離心5-10分鍾。這時(shí)應該可(kě)以見到管底蛋白沉澱,也可(kě)能見到一些(xiē)蛋白沉澱漂浮在液體(tǐ)表面。

8、小(xiǎo)心緩慢吸取上(shàng)清到一個(gè)新的1.5ml離心管中,不要吸到沉澱。

吸取上(shàng)清時(shí),注意不要吸到管底的和(hé)漂浮在液體(tǐ)表面的蛋白沉澱。如果不小(xiǎo)心将蛋白沉澱轉入新的離心管中,可(kě)再次離心2分鍾後取上(shàng)清。

9、加入等體(tǐ)積的室溫異丙醇(約400μl),颠倒30次混勻或者直到出現絮狀DNA沉澱(或者白色渾濁沉澱)。

10、12,000rpm離心1分鍾,在管底可(kě)以見到白色的DNA沉澱塊,倒棄上(shàng)清。

11、加入1ml 70%乙醇,颠倒幾次漂洗DNA沉澱,12,000rpm離心1分鍾, 倒去上(shàng)清(注意不要把DNA沉澱倒掉了),倒置後在吸水(shuǐ)紙上(shàng)輕敲幾下以控幹殘留乙醇,還(hái)可(kě)以用槍頭小(xiǎo)心吸掉管底沉澱周圍和(hé)管壁的殘留乙醇,空(kōng)氣晾幹沉澱幾分鍾。

注意不要幹燥過頭,否則DNA極其難溶;也不能殘留太多(duō)乙醇,否則乙醇可(kě)能抑制(zhì)下遊如酶切反應。

12、加入40μl DNA溶解液DS重新水(shuǐ)化溶解DNA沉澱,輕彈管壁混勻,可(kě)以放置在65℃溫育30-60分鍾(不要超過一小(xiǎo)時(shí)),也可(kě)以在室溫或者4℃放置過夜來(lái)重新水(shuǐ)化DNA。期間(jiān)不時(shí)的輕彈管壁幫助重新水(shuǐ)化DNA。

13、加入10-15μl RNase A(10mg/ml),或者1-2μl RNase A(100mg/ml)颠倒混勻,37℃溫育30-60分鍾去除殘留RNA。

該步驟主要作(zuò)用為(wèi)去除殘留的RNA,如果殘留RNA多(duō),可(kě)以适當延長時(shí)間(jiān)。如果殘留RNA不影(yǐng)響實驗,可(kě)略去該步驟。如果殘留的RNA酶可(kě)能影(yǐng)響實驗,也可(kě)以用等體(tǐ)積酚/氯仿抽提去除,然後用标準的乙醇沉澱回收DNA。

14、DNA可(kě)以存放在2-8℃,如果要長時(shí)間(jiān)存放,可(kě)以放置在-20℃。