一、适用範圍：

針對唾液樣本中的DNA進行(xíng)收集、保存、運輸、純化。

替代或者配套Oragene 唾液收集管使用。

二、試劑盒組成、儲存、穩定性：

                        本試劑盒在室溫儲存12個(gè)月不影(yǐng)響使用效果。

三、儲存事項:

① 細胞裂解液CB低(dī)溫時(shí)可(kě)能出現析出和(hé)沉澱，可(kě)以在37℃水(shuǐ)浴幾分鍾幫助重新溶解，恢複澄清透明(míng)後冷卻到室溫即可(kě)使用。

② 避免試劑長時(shí)間(jiān)暴露于空(kōng)氣中發生(shēng)揮發、氧化、pH值變化，各溶液使用後應及時(shí)蓋緊蓋子。

四、産品介紹：

傳統的人(rén)類基因組DNA樣品的采集往往需要抽血采集并提取全血基因組DNA獲得(de)。該方法有(yǒu)幾個(gè)明(míng)顯的缺點：需要一定的采血設備并需要具有(yǒu)醫(yī)務知識的人(rén)員來(lái)完成；抽血的疼痛造成排斥拒絕采樣；侵入性采集增加了感染的可(kě)能性；采集後血液樣品必須低(dī)溫運輸保存。本試劑盒可(kě)提供無疼痛、非侵入性的方法，患者不用忍受抽血的疼痛和(hé)感染的風險就能獲得(de)高(gāo)質量、高(gāo)數(shù)量的樣品，受測者排斥性低(dī)，嬰兒和(hé)老人(rén)都能方便取得(de)DNA樣本。收集過程十分簡單，受測者将唾液吐至保存液SS內(nèi)混勻就完成收集過程。混勻後常溫下可(kě)運輸保存長達一年不會(huì)變質。能夠節省運送、保存冷藏設備和(hé)電(diàn)力費用。收集的唾液通(tōng)過幾個(gè)簡單步驟便可(kě)提取DNA。抽取的DNA産量平均達110 μg / 2 mL唾液。

五、産品特點：

① 非侵入性采檢方式免除了抽血的疼痛和(hé)降低(dī)了污染風險，并增加了取檢的便利性，可(kě)由受檢者自行(xíng)取樣。

② 僅需2ml的唾液樣本，即可(kě)取得(de)約110μg的DNA(不同個(gè)體(tǐ)産量差異很(hěn)大(dà))。

③ 采樣後的檢體(tǐ)可(kě)穩定地儲存于室溫環境一年以上(shàng)。

六、唾液樣品收集步驟：

1、用清水(shuǐ)漱口1～2次，然後吐掉。

2、漱口後等候至少(shǎo)5分鍾方可(kě)采集唾液，期間(jiān)不要進食、飲用各種飲料。

3、将唾液(不是喉嚨中痰液)吐到5ml 采集管CT中，直至2ml 刻度位置。(不可(kě)将痰液吐到收集管中，若唾液不足，可(kě)做(zuò)口舌運動，促進分泌。浮在唾液上(shàng)層的少(shǎo)量泡沫不包括計(jì)算(suàn)在2ml唾液采集量內(nèi)，采集過程必須在30分鍾內(nèi)完成)

4、将等體(tǐ)積2ml保存液SS全部倒在5ml唾液采集管CT中，充分颠倒混勻後旋緊蓋子。

七、唾液DNA提取步驟(2ml唾液量舉例，可(kě)按比例放大(dà)縮小(xiǎo)每次提取的唾液量)：

細胞裂解

1、将保存液SS/唾液混合物放置于50°C 水(shuǐ)浴中至少(shǎo)1小(xiǎo)時(shí)或50°C空(kōng)氣孵箱至少(shǎo)2小(xiǎo)時(shí)。

2、轉移4ml混合物 (2 ml 唾液加2 ml保存液SS)到一個(gè)15 ml或者50 ml 的離心管。加入1ml裂解液和(hé)10 μl RNase A 溶液(10mg/ml). 高(gāo)速渦旋振蕩10秒(miǎo)後室溫放置 10分鍾。

雜質沉澱

3、加入1. 7 ml雜質沉澱液IP到上(shàng)述裂解混合物中。高(gāo)速渦旋振蕩25秒(miǎo)，充分混勻雜質沉澱液IP和(hé)裂解混合物。

4、8,000 x g 離心 5 分鍾。沉澱的雜質和(hé)蛋白會(huì)在管底形成一個(gè)緻密的沉澱團。如果蛋白沉澱不太緻密，可(kě)以冰上(shàng)放置5 分鍾，然後重複步驟4。

DNA 沉澱

5、仔細轉移上(shàng)清(含有(yǒu) DNA)到一個(gè)新的15 ml或者50 ml 的離心管。注意不要觸動管底沉澱。加入5ml異丙醇。(唾液DNA含量較低(dī)時(shí)，加入40μl Glycogen 20mg/ml可(kě)能提高(gāo)一些(xiē)産量)，輕柔颠倒混勻50次（有(yǒu)時(shí)可(kě)以看見沉澱）。

6、2,500 x g 離心3分鍾， 此時(shí)一般可(kě)在管底看到白色的DNA沉澱。

7、倒棄上(shàng)清， 倒置後在吸水(shuǐ)紙上(shàng)輕敲幾下以盡可(kě)能吸幹。加入5ml 70％乙醇，颠倒幾次漂洗DNA沉澱。

8、2,500 x g離心1分鍾, 仔細倒去上(shàng)清(沉澱很(hěn)松，注意不要把DNA沉澱倒掉了)。

9、倒置後在吸水(shuǐ)紙上(shàng)輕敲幾下以控幹殘留乙醇，還(hái)可(kě)以用槍頭小(xiǎo)心吸掉管底沉澱周圍和(hé)管壁的殘留乙醇，空(kōng)氣晾幹沉澱幾分鍾(不要幹過頭，也不要殘留乙醇)。

DNA 溶解水(shuǐ)化

10、加入250μl -400μl DNA溶解液DS重新水(shuǐ)化溶解DNA沉澱，輕彈管壁混勻。

11、可(kě)以放置在65℃溫育30-60分鍾(不要超過一小(xiǎo)時(shí))，然後在室溫或者4℃放置過夜來(lái)重新水(shuǐ)化DNA，中間(jiān)不時(shí)的輕彈管壁幫助重新水(shuǐ)化DNA。

12、DNA可(kě)以存放在2-8℃，如果要長時(shí)間(jiān)存放，可(kě)以放置在-20°C 或者-80°C。