1/适用範圍：

适用于快速提取真菌組織細胞基因組DNA。

2/試劑盒組成、儲存、穩定性：

                                  本試劑盒在室溫儲存12個(gè)月不影(yǐng)響使用效果。

3/儲存事項:

① 緩沖液A、C低(dī)溫時(shí)可(kě)能出現析出和(hé)沉澱，可(kě)以在65℃水(shuǐ)浴幾分鍾幫助重新溶解（緩沖液C加入乙醇前可(kě)加熱，加入乙醇後不可(kě)加熱），恢複澄清透明(míng)後冷卻到室溫即可(kě)使用。

② 避免試劑長時(shí)間(jiān)暴露于空(kōng)氣中産生(shēng)揮發、氧化、pH值變化，各溶液使用後應及時(shí)蓋緊蓋子。

4/産品介紹：

該試劑盒采用DNA吸附柱和(hé)新型獨特的溶液系統，适合于從真菌組織細胞中快速簡單地提取基因組DNA。可(kě)在30分鍾內(nèi)完成一個(gè)或多(duō)個(gè)100mg新鮮或20mg幹燥的真菌樣品DNA的純化工作(zuò)。提取過程不需要用到有(yǒu)毒的酚氯仿等有(yǒu)機物抽提，也不需要用到耗時(shí)的異丙醇或乙醇沉澱，并能快速高(gāo)效地去除多(duō)糖類、酚類和(hé)酶抑制(zhì)物等雜質，純化的DNA可(kě)直接用于PCR、酶切和(hé)雜交等實驗。

新鮮或幹燥的真菌組織（細胞）磨碎後經裂解液裂解；蛋白質、多(duō)糖、細胞殘片被沉澱去除；然後基因組DNA在高(gāo)離序鹽狀态下選擇性吸附于離心柱內(nèi)矽基質膜， 再通(tōng)過一系列快速的漂洗－離心的步驟, 進一步将多(duō)糖，多(duō)酚和(hé)細胞代謝物，蛋白等雜質去除， 最後低(dī)鹽的洗脫緩沖液将純淨基因組DNA從矽基質膜上(shàng)洗脫。

5/産品特點：

① 離心吸附柱內(nèi)矽基質膜全部采用特制(zhì)吸附膜，柱與柱之間(jiān)吸附量差異極小(xiǎo)，可(kě)重複性好。

② 不需要使用有(yǒu)毒的苯酚等試劑，也不需要乙醇沉澱等步驟。

③ 快速，簡捷，單個(gè)樣品操作(zuò)一般可(kě)在1小(xiǎo)時(shí)內(nèi)完成。

④ 數(shù)種去多(duō)糖、多(duō)酚成份和(hé)多(duō)次柱漂洗确保高(gāo)純度，OD260/OD280典型的比值達1.7～1.9，可(kě)直接用于PCR，Southern-blot和(hé)各種酶切反應。

6/注意事項：

① 所有(yǒu)的離心步驟均在室溫完成，使用轉速可(kě)以達到13，000 rpm的傳統台式離心機。

② 開(kāi)始實驗前将需要的水(shuǐ)浴先預熱到65℃備用。

③ 緩沖液C中含有(yǒu)刺激性化合物，操作(zuò)時(shí)要戴乳膠手套，避免沾染皮膚，眼睛和(hé)衣服。若沾染皮膚、眼睛時(shí)，要用大(dà)量清水(shuǐ)或者生(shēng)理(lǐ)鹽水(shuǐ)沖洗。

④ 不同來(lái)源的真菌組織細胞材料中提取DNA 的量會(huì)有(yǒu)差異，一般100mg新鮮組織典型産量可(kě)達3-25μg。

⑤ 洗脫液EB不含有(yǒu)螯合劑EDTA， 不影(yǐng)響下遊酶切、連接等反應。也可(kě)以使用水(shuǐ)洗脫， 但(dàn)應該确保pH大(dà)于7.5， pH過低(dī)影(yǐng)響洗脫效率。用水(shuǐ)洗脫DNA應該保存在－20℃。DNA如果需要長期保存，可(kě)以用TE緩沖液洗脫 （10mM Tris-HCl， 1mM EDTA，pH 8.0），但(dàn)是EDTA可(kě)能影(yǐng)響下遊酶切反應，使用時(shí)可(kě)以适當稀釋。

7/操作(zuò)步驟：（實驗前請(qǐng)先閱讀注意事項）

提示：● 第一次使用前請(qǐng)先在漂洗液WB中加入指定量無水(shuǐ)乙醇，充分混勻，加入後請(qǐng)及時(shí)在方框打鈎标記已加入乙醇，以免多(duō)次加入!

           ● 第一次使用前請(qǐng)先在緩沖液C中加入指定量無水(shuǐ)乙醇!

1、取适量真菌組織在研缽中加入液氮充分碾磨成細粉。

2、轉移細粉（新鮮真菌組織100 mg 或幹重組織20 mg）到一個(gè)1.5ml離心管，不要解凍，加入400μl緩沖液A 和(hé)4μl RNase A(10 mg/ml)，旋渦振蕩，充分混勻幫助裂解。

如果組織裂解困難，可(kě)根據需要加一個(gè)輕柔勻漿10秒(miǎo)的步驟幫助裂解。大(dà)多(duō)數(shù)情況下不需要離心去除未完全裂解的組織，因為(wèi)後面有(yǒu)一個(gè)離心去除的步驟。

可(kě)選：多(duō)糖含量特别高(gāo)的時(shí)候可(kě)以在緩沖液A加入2%PVP40，000; 多(duō)酚含量特别高(gāo)的時(shí)候可(kě)以在緩沖液A中加入0.2% beta巯基乙醇。也可(kě)兩者同時(shí)加入。

3、65℃水(shuǐ)浴10分鍾，在水(shuǐ)浴過程中颠倒離心管2-3次，混合樣品。

4、加入130 μl 緩沖液B，充分混勻，冰上(shàng)放置5分鍾， 14,000 rpm 離心5-10 分鍾，小(xiǎo)心吸取上(shàng)清到一個(gè)新的1.5ml離心管，注意不要吸到界面物質。

5、計(jì)算(suàn)上(shàng)清量，加入1.5倍體(tǐ)積的緩沖液C（請(qǐng)先檢查是否已加入無水(shuǐ)乙醇!），立即吹打混勻。

加入緩沖液C可(kě)能會(huì)出現絮狀沉澱，但(dàn)不影(yǐng)響DNA提取。注意将緩沖液C直接加入到上(shàng)清并立即吹打混勻。

6、将上(shàng)一步所得(de)混合物（包括可(kě)能出現的沉澱）加入一個(gè)吸附柱DA中，（吸附柱DA放入收集管CT中）13,000 rpm離心30-60秒(miǎo)，倒掉收集管CT中的廢液（先加650μl離心，棄廢液，再加入剩餘的溶液，再次離心）。

7、加入600μl漂洗液WB（請(qǐng)先檢查是否已加入無水(shuǐ)乙醇!），12,000 rpm 離心30秒(miǎo)，棄掉廢液。

8、加入600μl漂洗液WB，12,000 rpm 離心30秒(miǎo)，棄掉廢液。

9、将吸附柱DA放回空(kōng)收集管CT中，13,000 rpm離心2分鍾，盡量除去漂洗液， 以免漂洗液中殘留乙醇抑制(zhì)下遊反應。

10、取出吸附柱DA，放入一個(gè)幹淨的離心管中，在吸附膜的中間(jiān)部位加100μl洗脫緩沖液EB， 室溫放置3-5分鍾，12,000 rpm 離心1分鍾。将得(de)到的溶液重新加入吸附柱中，室溫放置2分鍾，12,000 rpm離心1分鍾。

洗脫體(tǐ)積越大(dà)，洗脫效率越高(gāo)，如果預計(jì)和(hé)需要産量高(gāo)，可(kě)增大(dà)洗脫體(tǐ)積，如果需要DNA濃度較高(gāo)，可(kě)以适當減少(shǎo)洗脫體(tǐ)積， 但(dàn)是最小(xiǎo)體(tǐ)積不應少(shǎo)于50μl，體(tǐ)積過小(xiǎo)降低(dī)DNA洗脫效率，減少(shǎo)DNA産量。

11、DNA可(kě)以存放在2-8℃,如果要長時(shí)間(jiān)存放，可(kě)以放置在－20℃。

8/問題與解決方法