1/适用範圍：

适合于從微量血液、法醫(yī)材料、幹血點、藥簽等微量樣品中分離純化基因組DNA。

2/試劑盒組成、儲存、穩定性：

                                    本試劑盒在室溫儲存12個(gè)月不影(yǐng)響使用效果

3/儲存事項：

① 結合液CB或者抑制(zhì)物去除液IR低(dī)溫時(shí)可(kě)能出現析出和(hé)沉澱，可(kě)以在37℃水(shuǐ)浴幾分鍾幫助重新溶解，恢複澄清透明(míng)後冷卻到室溫即可(kě)使用。

② 為(wèi)避免降低(dī)活性，方便運輸，提供蛋白酶K為(wèi)凍幹粉狀，收到後，可(kě)短(duǎn)暫離心後，加入1ml滅菌水(shuǐ)溶解。因為(wèi)反複凍融可(kě)能會(huì)降低(dī)酶活性，因此溶解後立即按照每次使用量(20μl)分裝凍存，－20℃保存。

③ 避免試劑長時(shí)間(jiān)暴露于空(kōng)氣中發生(shēng)揮發、氧化、pH值變化，各溶液使用後應及時(shí)蓋緊蓋子。仔細閱讀注意事項4。

4/産品介紹：

本試劑盒采用特制(zhì)的進口DNA吸附柱和(hé)獨特的緩沖液系統，特别适合于從微量血液、法醫(yī)材料、幹血點、藥簽、口香糖、尿液等微量樣品中分離純化基因組DNA。各種來(lái)源樣品裂解消化處理(lǐ)後DNA在高(gāo)離序鹽狀态下選擇性吸附于離心柱內(nèi)矽基質膜（特别配備了Poly Carrier可(kě)以從體(tǐ)系中輕松捕獲微量核酸），再通(tōng)過一系列快速的漂洗－離心的步驟，将鹽、細胞代謝物、蛋白等雜質去除，最後低(dī)鹽的洗脫緩沖液将純淨的基因組DNA從矽基質膜上(shàng)洗脫。純化後的DNA無雜質和(hé)PCR抑制(zhì)劑，可(kě)直接适用于PCR分析。

5/産品特點：

① 不需要使用有(yǒu)毒的苯酚等試劑，也不需要乙醇沉澱等步驟。

② 節省時(shí)間(jiān)，簡捷，單個(gè)樣品操作(zuò)一般可(kě)在20分鍾內(nèi)完成。

③ 配備了Poly Carrier用于充分收集特别微量DNA。

④ 多(duō)次柱漂洗确保高(gāo)純度，提取的DNA 純度高(gāo)，質量穩定可(kě)靠，可(kě)适用于各種常規操作(zuò)，包括PCR、酶切、測序、Southern 雜交等。

6/注意事項：

① 所有(yǒu)的離心步驟均在室溫完成，使用轉速可(kě)以達到13,000rpm的傳統台式離心機。

② 開(kāi)始實驗前将需要的水(shuǐ)浴先預熱到所需溫度備用。部分樣品需要準備1M DTT。

③ 結合液CB 和(hé)抑制(zhì)物去除液IR中含有(yǒu)刺激性化合物，操作(zuò)時(shí)戴乳膠手套，避免沾染皮膚、眼睛和(hé)衣服。若沾染皮膚、眼睛時(shí)，要用大(dà)量清水(shuǐ)或者生(shēng)理(lǐ)鹽水(shuǐ)沖洗。

④ Poly Carrier：Poly Carrier使用方法：如果起始處理(lǐ)量很(hěn)少(shǎo)（例如小(xiǎo)于10μl全血和(hé)法醫(yī)樣品），我們推薦使用Poly Carrier，如果預期有(yǒu)較大(dà)量DNA産量，用戶可(kě)以根據需要選擇是否加入Poly Carrier。使用時(shí)在每個(gè)樣品提取所需結合液CB 中加入2μl Poly Carrier儲存溶液， 将結合液CB與Poly Carrier溶液充分颠倒混勻即可(kě)(結合液CB容易起泡沫,請(qǐng)勿使用渦旋振蕩混勻)。也可(kě)根據樣品數(shù)量，在總共需要的結合液CB中加入總共需要的Poly Carrier混勻備用。混合液在室溫24小(xiǎo)時(shí)內(nèi)穩定。

7/操作(zuò)步驟：（實驗前請(qǐng)先閱讀注意事項）

提示：第一次使用前請(qǐng)先在15ml漂洗液WB中加入60ml無水(shuǐ)乙醇，充分混勻，加入後請(qǐng)及時(shí)在方框打鈎标記已加入乙醇，以免多(duō)次加入!

1. 血液樣品
   1. 取1-100μl血液到1.5ml 的離心管中。
   2. 如果不足100μl，加入裂解液ML補足到100μl。
   3. 加入10μl的蛋白酶K (20mg/ml)溶液，充分混勻，再加入100μl結合液CB，立刻渦旋振蕩充分混勻，在70℃放置10分鍾。

如果處理(lǐ)樣品<10μl,建議在100μl結合液CB 中加入1μl Poly Carrier儲存溶液。

1. 4. 冷卻後加入50μl無水(shuǐ)乙醇，立刻渦旋振蕩充分混勻，室溫放置3分鍾。

如果周圍環境高(gāo)于25℃,乙醇需要冰上(shàng)預冷後再加入。

1. 5. 接操作(zuò)步驟項下7。
2. 幹血點

1. 用打孔機打孔的方法在血卡(上(shàng)面有(yǒu)幹血點) 上(shàng)沖取3mm(1/8英寸) 直徑血卡小(xiǎo)片(上(shàng)面有(yǒu)幹血點),最多(duō)将3個(gè)直徑3mm血卡小(xiǎo)片放入1.5ml 的離心管中。

一般血液應該點在特定紙或者血卡上(shàng)面幹燥,如903 paper or IsoCode paper (Schleicher & Schuell), BloodstainCard or FTA Card (Whatman), Guthrie test cards, or comparable blood cards.

2. 加入180μl裂解液ML。
3. 加入20μl的蛋白酶K (20mg/ml)溶液，立刻渦旋振蕩充分混勻。
4. 56℃軌道(dào)搖床上(shàng)面900rpm振搖1小(xiǎo)時(shí)。

如果沒有(yǒu)可(kě)加熱軌道(dào)搖床，可(kě)以在水(shuǐ)浴或者heating block上(shàng)進行(xíng)，每10分鍾渦旋振蕩10秒(miǎo)幫助裂解。

5. 加入200μl結合液CB，立刻渦旋振蕩充分混勻。

如果隻處理(lǐ)一個(gè)3mm血卡小(xiǎo)片，建議在200μl結合液CB 中加入2μl Poly Carrier儲存溶液。

6. 70℃軌道(dào)搖床上(shàng)面900rpm振搖10分鍾。

如果沒有(yǒu)可(kě)加熱軌道(dào)搖床，可(kě)以在水(shuǐ)浴或者heating block上(shàng)面進行(xíng)，每3分鍾渦旋振蕩10秒(miǎo)幫助裂解。

7. 接操作(zuò)步驟項下7。

3. 組織樣品

1. 新鮮或者解凍的組織在液氮中研磨成細粉後或者用解剖刀切成小(xiǎo)碎塊（切成微塊可(kě)以提高(gāo)産量）後取<10mg，轉入裝有(yǒu)180μl裂解液ML的1.5ml離心管中， 用大(dà)口徑槍頭吹打混勻。
2. 加入20μl的蛋白酶K溶液(20mg/ml)，立刻渦旋振蕩充分混勻。
3. 将裂解物放置在56℃水(shuǐ)浴過夜或者直到組織消化完全，期間(jiān)輕柔的振蕩幾次幫助裂解。

    對于小(xiǎo)量的組織，一般4－6小(xiǎo)時(shí)即可(kě)，但(dàn)是過夜消化可(kě)以得(de)到最佳結果。

4. 加入200μl 結合液CB，立刻渦旋振蕩充分混勻。

     如果處理(lǐ)樣品量少(shǎo), 建議在200μl結合液CB 中加入2μl Poly Carrier儲存溶液。

5. 冷卻後加200μl 無水(shuǐ)乙醇，立刻渦旋振蕩充分混勻，室溫放置5分鍾。
6. 如果周圍環境高(gāo)于25℃,乙醇需要冰上(shàng)預冷後再加入。
7. 接操作(zuò)步驟項下7。

4. 口香糖

1. 将30mg口香糖切成小(xiǎo)塊放入1.5ml離心管，加入280μl裂解液ML和(hé)20μl的蛋白酶K溶液(20mg/ml)，立刻渦旋振蕩充分混勻。
2. 56℃軌道(dào)搖床上(shàng)面900rpm振搖至少(shǎo)3小(xiǎo)時(shí)。

如果沒有(yǒu)可(kě)加熱軌道(dào)搖床，可(kě)以在水(shuǐ)浴或者heating block上(shàng)面進行(xíng)，每10分鍾渦旋振蕩10秒(miǎo)幫助裂解。

3. 加入200μl 結合液CB（加入2μl Poly Carrier），立刻渦旋振蕩充分混勻。
4. 70℃軌道(dào)搖床上(shàng)面900rpm振搖1小(xiǎo)時(shí)。

如果沒有(yǒu)可(kě)加熱軌道(dào)搖床，可(kě)以在水(shuǐ)浴或者heating block上(shàng)面進行(xíng)，每10分鍾渦旋振蕩10秒(miǎo)幫助裂解。

5. 冷卻後加200μl無水(shuǐ)乙醇，立刻渦旋振蕩充分混勻。
6. 最高(gāo)速（約14,000rpm）離心1分鍾，取上(shàng)清加入一個(gè)吸附柱DA中，（吸附柱放入收集管CT中）13,000rpm離心30-60秒(miǎo)，倒掉收集管CT中的廢液。
7. 接操作(zuò)步驟項下8。

5. 法醫(yī)材料
   0. 剪下1 cm2煙頭或者過濾嘴外層紙，切成6小(xiǎo)塊放入1.5ml離心管，加入300μl裂解液ML和(hé)20μl的蛋白酶K溶液(20mg/ml)，立刻渦旋振蕩充分混勻。接步驟b。
   0. 剪下0.5-2.5 cm2信封或者郵票(piào)，切成小(xiǎo)塊放入1.5ml離心管，加入300μl裂解液ML和(hé)20μl的蛋白酶K溶液(20mg/ml)，立刻渦旋振蕩充分混勻。接步驟b。
   0. 從毛發根部毛囊處開(kāi)始剪下0.5-1 cm長度毛發放入1.5ml離心管，加入280μl裂解液ML和(hé)20μl的蛋白酶K溶液(20mg/ml)和(hé)20μl 1M DTT溶液，立刻渦旋振蕩充分混勻。接步驟b。
   0. 将指甲剪成小(xiǎo)塊放入1.5ml離心管，加入280μl裂解液ML和(hé)20μl的蛋白酶K溶液(20mg/ml)和(hé)20μl 1M DTT溶液，立刻渦旋振蕩充分混勻。接步驟b。
   0. 将約0.5cm2信封沾染了血液、唾液、精液的材料剪成小(xiǎo)塊放入1.5ml離心管，加入300μl裂解液ML和(hé)20μl的蛋白酶K溶液(20mg/ml) (如果是精液需另加入20μl 1M DTT溶液)，立刻渦旋振蕩充分混勻。接步驟b。

2. 56℃軌道(dào)搖床上(shàng)面900rpm振搖1小(xiǎo)時(shí)。

如果沒有(yǒu)可(kě)加熱軌道(dào)搖床，可(kě)以在水(shuǐ)浴或者heating block上(shàng)面進行(xíng)，每10分鍾渦旋振蕩10秒(miǎo)幫助裂解。

一般毛發1小(xiǎo)時(shí)裂解可(kě)以完成，如果不完全可(kě)以延長時(shí)間(jiān)。指甲等難裂解物建議過夜裂解。最後沒有(yǒu)裂解的不溶物在後續步驟e中會(huì)通(tōng)過離心去除。

3. 加入200μl結合液CB（加入2μl Poly Carrier），立刻渦旋振蕩充分混勻。
4. 70℃軌道(dào)搖床上(shàng)面900rpm振搖1小(xiǎo)時(shí)。
5. 最高(gāo)速（約14,000rpm）離心1分鍾，取上(shàng)清加入一個(gè)吸附柱DA中，（吸附柱放入收集管CT中）13,000rpm離心30-60秒(miǎo)，倒掉收集管CT中的廢液。
6. 接操作(zuò)步驟項下8。

6. 微切割樣品（包括福爾馬林固定的微切割樣品）

1. 加入15μl裂解液ML 到0.2 ml 離心管中，放入微切割樣品。
2. 加入10μl的蛋白酶K溶液(20mg/ml) ，立刻渦旋振蕩充分混勻。
3. 56℃水(shuǐ)浴3小(xiǎo)時(shí)（福爾馬林樣品16小(xiǎo)時(shí)）至裂解完全，中間(jiān)不時(shí)颠倒渦旋。
4. 加入15μl裂解液ML，再加入50μl結合液CB（加入1μl PolyCarrier），立刻渦旋振蕩充分混勻。
5. 冷卻後加入50μl無水(shuǐ)乙醇，立刻渦旋振蕩充分混勻，室溫放置5分鍾。

如果周圍環境高(gāo)于25℃,乙醇需要冰上(shàng)預冷後再加入。

6. 接操作(zuò)步驟項下7。

7. 将上(shàng)一步混合物（包括可(kě)能有(yǒu)的沉澱）加入一個(gè)吸附柱DA中，（吸附柱放入收集管CT中）13,000rpm離心30-60秒(miǎo)，倒掉收集管CT中的廢液。
8. 加入500μl抑制(zhì)物去除液IR，12,000rpm 離心30秒(miǎo)，棄廢液。
9. 加入600μl漂洗液WB（請(qǐng)先檢查是否已加入無水(shuǐ)乙醇!），12,000rpm 離心30秒(miǎo)，棄掉廢液。
10. 加入600μl漂洗液WB，12,000rpm 離心30秒(miǎo)，棄掉廢液。
11. 将吸附柱DA放回空(kōng)收集管CT中，13,000rpm離心2分鍾，盡量除去漂洗液， 以免漂洗液中殘留乙醇抑制(zhì)下遊反應。
12. 取出吸附柱DA，放入一個(gè)幹淨的離心管中，在吸附膜的中間(jiān)部位加20－50μl洗脫緩沖液EB （洗脫緩沖液事先在65-70℃水(shuǐ)浴中預熱效果更好）， 室溫放置2-5分鍾，12,000rpm 離心1分鍾。将得(de)到的溶液重新加入離心吸附柱中，室溫放置2分鍾，12,000rpm離心1分鍾。

洗脫體(tǐ)積越大(dà)，洗脫效率越高(gāo)，如果需要DNA濃度較高(gāo)，可(kě)以适當減少(shǎo)洗脫體(tǐ)積， 但(dàn)是最小(xiǎo)體(tǐ)積不應少(shǎo)于20μl，體(tǐ)積過小(xiǎo)降低(dī)DNA洗脫效率，減少(shǎo)DNA産量。

13. DNA可(kě)以存放在2-8℃，如果要長時(shí)間(jiān)存放，可(kě)以放置在－20℃。