1/适用範圍：

适用于快速提取M13噬粒單鏈DNA。

2/試劑盒組成、儲存、穩定性：

                                   本試劑盒在室溫儲存12個(gè)月不影(yǐng)響使用效果。

3/儲存事項:

① 結合液MS低(dī)溫時(shí)可(kě)能出現析出和(hé)沉澱，可(kě)以在37℃水(shuǐ)浴幾分鍾幫助重新溶解，恢複澄清透明(míng)後冷卻到室溫即可(kě)使用。

② 避免試劑長時(shí)間(jiān)暴露于空(kōng)氣中産生(shēng)揮發、氧化、pH值變化，各溶液使用後應及時(shí)蓋緊蓋子。

4/産品介紹：

M13和(hé)其它的絲狀噬菌體(tǐ)載體(tǐ)，在文庫構建和(hé)為(wèi)序列測序提供單鏈DNA和(hé)引人(rén)突變方面十分有(yǒu)用。将适量M13絲狀噬菌體(tǐ)或者相關噬粒（M13來(lái)源）感染的液體(tǐ)培養物離心，上(shàng)清中的單鏈噬菌體(tǐ)DNA在高(gāo)離序鹽狀态下選擇性吸附于離心柱內(nèi)矽基質膜，再通(tōng)過一系列快速的漂洗－離心的步驟，将鹽、細胞代謝物，蛋白等雜質去除，最後低(dī)鹽的洗脫緩沖液将純淨噬菌體(tǐ)單鏈DNA從矽基質膜上(shàng)洗脫。

5/産品特點：

① 不需要使用有(yǒu)毒的苯酚等試劑，也不需要乙醇沉澱等步驟。

② 節省時(shí)間(jiān)，簡捷，單個(gè)樣品操作(zuò)一般可(kě)在10分鍾內(nèi)完成。

③ 産量高(gāo)，典型的産量800µl M13絲狀噬菌體(tǐ)上(shàng)清可(kě)以提取3µg噬菌體(tǐ)單鏈DNA。

④ 多(duō)次柱漂洗确保高(gāo)純度，OD260/OD280典型的比值達1.7～1.9。可(kě)以直接用來(lái)測序，一般典型可(kě)辨認讀長達650bp。

6/注意事項

① 所有(yǒu)的離心步驟均在室溫完成，使用轉速可(kě)以達到13,000rpm的傳統台式離心機。

② 開(kāi)始實驗前将需要的水(shuǐ)浴先預熱到50℃備用。

③ 結合液MS含有(yǒu)刺激性化合物，操作(zuò)時(shí)要戴乳膠手套，避免沾染皮膚，眼睛和(hé)衣服。若沾染皮膚、眼睛時(shí)，要用大(dà)量清水(shuǐ)或者生(shēng)理(lǐ)鹽水(shuǐ)沖洗。

7/操作(zuò)步驟:（實驗前請(qǐng)先閱讀注意事項）

以800μl噬菌體(tǐ)感染細菌培養上(shàng)清提取舉例:

提示：第一次使用前請(qǐng)先在漂洗液WB中加入指定量無水(shuǐ)乙醇，充分混勻，加入後請(qǐng)及時(shí)在方框打鈎标記已加入乙醇，以免多(duō)次加入!

1、将M13絲狀噬菌體(tǐ)或者相關噬粒（M13來(lái)源）感染的液體(tǐ)培養物分裝在1.5毫升離心管，12,000rpm離心5分鍾沉澱菌體(tǐ)。

2、小(xiǎo)心取800μl上(shàng)清轉入新的1.5ml離心管，加入400μl結合液MS，充分混勻。

如果使用的上(shàng)清大(dà)于或者小(xiǎo)于800μl，則結合液MS的用量需要按照比例增加或者減少(shǎo)。

3、将上(shàng)述混合物加入一個(gè)吸附柱DA中，（吸附柱放入收集管CT中）13,000rpm離心15秒(miǎo)，倒掉收集管CT中的廢液。

吸附柱一次最多(duō)隻可(kě)以容納大(dà)約700μl混合物，因此需要分次把混合物加到吸附柱內(nèi)，重複步驟3。

4、加入600μl漂洗液WB（請(qǐng)先檢查是否已加入無水(shuǐ)乙醇!），12,000rpm 離心30秒(miǎo)，棄廢液。

5、将吸附柱DA放回空(kōng)收集管CT中，13,000rpm離心2分鍾，盡量除去漂洗液， 以免漂洗液中殘留乙醇抑制(zhì)下遊反應。

6、取出吸附柱DA，放入一個(gè)幹淨的離心管中，在吸附膜的中間(jiān)部位加60μl洗脫緩沖液EB（洗脫緩沖液事先在 50℃水(shuǐ)浴中預熱）， 室溫放置1分鍾，12,000rpm 離心1分鍾。如果想得(de)到較多(duō)量的DNA，可(kě)将得(de)到的溶液重新加入離心吸附柱中，10,000rpm離心1分鍾。

洗脫體(tǐ)積越大(dà)，洗脫效率越高(gāo)，如果需要DNA濃度較高(gāo)，可(kě)以适當減少(shǎo)洗脫體(tǐ)積， 但(dàn)是最小(xiǎo)體(tǐ)積不應少(shǎo)于40μl，體(tǐ)積過小(xiǎo)降低(dī)DNA洗脫效率，減少(shǎo)DNA産量。

7、DNA可(kě)以存放在2-8℃，如果要長時(shí)間(jiān)存放，可(kě)以放置在－20℃。

8/附錄（M13噬菌體(tǐ)感染細菌培養上(shàng)清準備過程）:

下面舉例說明(míng)M13噬菌體(tǐ)感染細菌培養上(shàng)清準備過程，詳細的M13噬菌體(tǐ)（或M13來(lái)源噬粒）培養和(hé)上(shàng)清準備過程請(qǐng)參見『分子克隆』第二版。

1、37℃ 振搖過夜培養合适的噬菌體(tǐ)宿主菌（如JM109）。

2、使用6％的過夜培養菌接種新鮮的LB培養液，37℃振搖培養一個(gè)小(xiǎo)時(shí)。

3、根據M13噬菌體(tǐ)的儲存液的濃度（滴度）按照0.5-1.5%(V/V)的比例加入噬菌體(tǐ)來(lái)感染宿主菌。37℃振搖培養5-6個(gè)小(xiǎo)時(shí)。

4、将上(shàng)面M13絲狀噬菌體(tǐ)或者相關噬粒（M13來(lái)源）感染的液體(tǐ)培養物分裝在1.5ml離心管，12,000rpm離心5分鍾沉澱菌體(tǐ)。

5、可(kě)選步驟: 小(xiǎo)心取1ml上(shàng)清轉入新的1.5ml離心管， 重複步驟4離心5分鍾。這步有(yǒu)助于去除上(shàng)清中殘留的微量宿主菌RNA或者DNA。

6、小(xiǎo)心取800μl上(shàng)清轉入新的1.5ml離心管。

7、現在可(kě)以按照操作(zuò)步驟提取噬菌體(tǐ)單鏈DNA。、

9/問題與解決方法: