1/試劑盒組成、儲存、穩定性：

               本産品收到後按照上(shàng)面指示溫度存放各成份 ，6個(gè)月內(nèi)有(yǒu)效。

2/産品介紹：

凋亡中晚期細胞形态學變化為(wèi)染色質在局部區(qū)域凝集，固縮，繼而核碎裂出現凋亡小(xiǎo)體(tǐ)。在Hoeschst染色下，細胞核或者凋亡小(xiǎo)體(tǐ)的DNA會(huì)呈現緻密濃染或者碎塊狀緻密濃染。本試劑盒Hoechst染料紫外光激發波長350-370 nm；發射波長465 nm，在熒光顯微鏡下DNA發出藍(lán)色熒光。

3/注意事項：

1、需可(kě)以觀察藍(lán)色熒光的熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡。

2、需PBS或0.9%NaCl溶液，蓋玻片與載玻片。

3、熒光容易淬滅，應該盡量避光操作(zuò)和(hé)保存。

4/操作(zuò)步驟：（實驗前請(qǐng)先閱讀注意事項）

貼壁細胞

1、取普通(tōng)潔淨蓋玻片于70%乙醇中浸泡5分鍾或更長時(shí)間(jiān)，無菌超淨台內(nèi)吹幹或用細胞培養級PBS或0.9%NaCl等溶液洗滌三遍，再用細胞培養液洗滌一遍。将蓋玻片置于六孔闆內(nèi)，種入細胞培養過夜，使約為(wèi)50%-80%滿。

2、刺激細胞發生(shēng)凋亡後，吸盡培養液，加入0.5ml固定液FS，固定10分鍾或更長時(shí)間(jiān)（可(kě)4℃過夜）。

本試劑盒使用固定液FS主要為(wèi)4％多(duō)聚甲醛，如果不适合您的細胞或者效果不佳，很(hěn)多(duō)種固定配方如細胞固定液FS『甲醇：冰乙酸（ 3∶1 ）現配』，都可(kě)以使用，可(kě)以根據自己細胞特點選用适合的固定方法。

3、去固定液FS，用PBS或0.9%NaCl洗兩遍，每次3分鍾，吸盡液體(tǐ)。洗滌時(shí)宜用搖床，或手動晃動數(shù)次。

4、取5μl 100×染色濃縮液DC與0.5ml染色稀釋緩沖液DS混合後加入染色5-10分鍾，也宜用搖床，或手動晃動數(shù)次。

5、用PBS或0.9%NaCl洗兩遍，每次3分鍾。

6、滴一滴封片液于載玻片上(shàng)，蓋上(shàng)貼有(yǒu)細胞的蓋玻片，盡量避免氣泡。使細胞接觸封片液，切勿弄反。熒光顯微鏡可(kě)檢測到呈藍(lán)色的細胞核。激發波長在350nm左右，發射波長在460nm左右。

封片液可(kě)使用50％PBS/50％甘油（等體(tǐ)積混合），如果熒光淬滅太快影(yǐng)響觀察，應該選用商品化的抗熒光淬滅封片液。

懸浮細胞

1、離心收集細胞樣品于1.5ml離心管內(nèi)，加入0.5ml固定液FS，緩緩懸起細胞，固定10分鍾或更長時(shí)間(jiān)（可(kě)4℃過夜）。

2、離心去固定液FS，用PBS或0.9%NaCl洗兩遍，每次3分鍾。洗滌期間(jiān)手動晃動。

3、最後一次離心後吸去大(dà)部分液體(tǐ)保留約50μl 液體(tǐ)，再緩緩懸起細胞，滴加至載玻片上(shàng)，盡量使細胞分布均勻。

4、稍晾幹，使細胞貼在載玻片上(shàng)不易随液體(tǐ)流動。

5、取5μl 100×染色濃縮液DC與0.5ml染色稀釋緩沖液DS混合後均勻滴上(shàng)染色5-10分鍾，用吸水(shuǐ)紙從邊緣吸去液體(tǐ)，微晾幹。

6、用PBS或0.9%NaCl洗兩遍，每次3分鍾。

7、和(hé)貼壁細胞一樣封片觀察。

組織切片

1、對于任何常見切片，處理(lǐ)至常規可(kě)以進行(xíng)免疫染色時(shí)，或完成常規的免疫染色後，即可(kě)進行(xíng)後續的Hoeschst染色。

2、PBS或0.9%NaCl洗兩遍，每次3分鍾，吸盡液體(tǐ)。洗滌時(shí)宜用搖床，或手動晃動數(shù)次。可(kě)在六孔闆中操作(zuò)。

3、取5μl 100×染色濃縮液DC與0.5ml染色稀釋緩沖液DS混合後加入染色5-10分鍾，也宜用搖床，或手動晃動數(shù)次。

4、用PBS或0.9%NaCl洗兩遍，每次3分鍾。

5、和(hé)貼壁細胞一樣封片觀察。