一、适用範圍：

适用于快速提取各種土壤基因組DNA。

二、試劑盒組成、儲存、穩定性：

                                      本試劑盒在室溫儲存12個(gè)月不影(yǐng)響使用效果。

三、儲存事項:

① 溶液L或者抑制(zhì)物去除液IR低(dī)溫時(shí)可(kě)能出現析出和(hé)沉澱，可(kě)以在37℃水(shuǐ)浴幾分鍾幫助重新溶解，恢複澄清透明(míng)後冷卻到室溫即可(kě)使用,注意不要劇(jù)烈搖晃，以免産生(shēng)大(dà)量氣泡。

② 為(wèi)避免降低(dī)活性，方便運輸，提供蛋白酶K為(wèi)凍幹粉狀，收到後，可(kě)短(duǎn)暫離心後，加入1ml滅菌水(shuǐ)溶解，因為(wèi)反複凍融可(kě)能會(huì)降低(dī)酶活性，因此溶解後立即按照每次使用量( 20μl )分裝凍存，－20℃保存。

③ 避免試劑長時(shí)間(jiān)暴露于空(kōng)氣中産生(shēng)揮發、氧化、pH值變化，各溶液使用後應及時(shí)蓋緊蓋子。

四、産品介紹：

普通(tōng)的手提或者試劑盒提取的土壤基因組DNA由于常常殘留有(yǒu)PCR的強烈抑制(zhì)物如腐殖酸、棕黃酸等雜質造成實驗失敗，此外，由于采用了劇(jù)烈的玻璃珠擊打來(lái)破裂菌體(tǐ)，常常造成DNA剪切和(hé)降解。本公司經過長期研發開(kāi)發出了具有(yǒu)自主知識産權的土壤基因組DNA，通(tōng)過專利配方的腐殖酸和(hé)棕黃酸去除試劑配合特殊處理(lǐ)的純化柱，可(kě)以最大(dà)程度的去除這些(xiē)雜質，同時(shí)加上(shàng)多(duō)次柱漂洗，确保得(de)到的DNA具有(yǒu)極高(gāo)純度，此外獨特的抽提和(hé)裂解體(tǐ)系可(kě)以迅速裂解細胞（壁）和(hé)滅活細胞內(nèi)核酸酶，不需要借助玻璃珠破壁，有(yǒu)效保證了基因組DNA的完整性。

五、産品特點：

① 本公司獨有(yǒu)的專利配方和(hé)純化柱能有(yǒu)效去除腐殖酸等雜質。

② 不需要借助玻璃珠破壁，有(yǒu)效保證了基因組DNA的完整性，長度可(kě)達30kb -50kb，可(kě)直接用于PCR，Southern-blot和(hé)各種酶切反應。

③ 兼容性強，适用于各種不同的土壤包括淤泥等提取困難的土壤。

④ 多(duō)步驟去除各種雜質和(hé)抑制(zhì)物，保證極高(gāo)純度，OD260/OD280典型的比值達1.7～1.9。

⑤ 不需要使用有(yǒu)毒的苯酚等試劑，也不需要乙醇沉澱等步驟。

⑥ 快速，簡捷，單個(gè)樣品操作(zuò)一般可(kě)在60分鍾內(nèi)完成。

六、注意事項：

① 所有(yǒu)的離心步驟均在室溫完成，使用轉速可(kě)以達到13,000rpm的傳統台式離心機。

② 開(kāi)始實驗前根據需要将水(shuǐ)浴預熱到37℃或者70℃備用。

③ 溶液C和(hé)抑制(zhì)物去除液IR中含有(yǒu)刺激性化合物，操作(zuò)時(shí)要戴乳膠手套，避免沾染皮膚，眼睛和(hé)衣服。若沾染皮膚、眼睛時(shí)，要用大(dà)量清水(shuǐ)或者生(shēng)理(lǐ)鹽水(shuǐ)沖洗。

④ 洗脫液EB不含有(yǒu)螯合劑EDTA，不影(yǐng)響下遊酶切、連接等反應。也可(kě)以使用水(shuǐ)洗脫，但(dàn)應該确保批pH大(dà)于7.5， pH過低(dī)影(yǐng)響洗脫效率。用水(shuǐ)洗脫DNA應該保存在－20℃。DNA如果需要長期保存，可(kě)以用TE緩沖液洗脫（10mM Tris-HCl， 1mM EDTA，pH 8.0），但(dàn)是EDTA可(kě)能影(yǐng)響下遊酶切反應，使用時(shí)可(kě)以适當稀釋。

七、操作(zuò)步驟：（實驗前請(qǐng)先閱讀注意事項）

提示：第一次使用前請(qǐng)先在漂洗液WB和(hé)溶液C中加入指定量無水(shuǐ)乙醇，充分混勻，加入後請(qǐng)及時(shí)在方框打鈎标記已加入乙醇，以免多(duō)次加入!

1、 取0.2g 土壤放入離心管，用牙簽或者槍頭搗碎後加入0.5ml溶液S，用槍頭攪拌後短(duǎn)暫渦旋幫助重懸。如果預計(jì)土壤裏面含有(yǒu)較多(duō)難裂解的菌類如革蘭氏陽性菌，可(kě)先在0.5ml溶液S裏面加入10mg的溶菌酶，吹打混勻後再加入，并加做(zuò)步驟2。

2、（可(kě)選步驟）:37℃溫育30分鍾，每10分鍾颠倒混勻幾次。對于難裂解的菌類如革蘭氏陽性菌含量豐富的土壤，并在上(shàng)一步驟加入了溶菌酶的樣品，需要加做(zuò)此步驟來(lái)幫助裂解。 

3、加入20μl蛋白酶K (20mg/ml)溶液，短(duǎn)暫渦旋幫助混勻。可(kě)選做(zuò)步驟: 為(wèi)提高(gāo)産量，可(kě)以在37℃振蕩10分鍾或者渦旋振蕩2分鍾。（注意渦旋振蕩可(kě)能剪切DNA）

4、加入120μl 溶液L，短(duǎn)暫渦旋混勻，65℃溫育30分鍾，期間(jiān)颠倒混勻幾次。65℃溫育時(shí)間(jiān)可(kě)以根據具體(tǐ)樣品種類和(hé)産量進行(xíng)延長或者縮短(duǎn)以取得(de)最佳産量和(hé)純度，可(kě)在10分鍾－2小(xiǎo)時(shí)範圍內(nèi)調整。

5、（可(kě)選步驟）:于－70℃冷凍，65℃融化，反複3次。對于難裂解的菌類如革蘭氏陽性菌含量豐富的土壤， 可(kě)加做(zuò)此步驟來(lái)幫助裂解。 

6、颠倒混勻後，13,000 rpm離心2分鍾,小(xiǎo)心轉移上(shàng)清至新的離心管（記錄上(shàng)清體(tǐ)積）。

7、加入1/3(三分之一)體(tǐ)積的溶液A,颠倒幾次，渦旋5秒(miǎo)混勻後，冰上(shàng)放置5分鍾。

8、13,000 rpm離心5分鍾,小(xiǎo)心轉移上(shàng)清至新的離心管（記錄上(shàng)清體(tǐ)積）。

9、加入1/3(三分之一)體(tǐ)積的溶液B,颠倒幾次，短(duǎn)暫渦旋混勻後，冰上(shàng)放置5分鍾。該步驟主要是進一步去除humic substance等PCR抑制(zhì)物質以提高(gāo)純度，但(dàn)是會(huì)降低(dī)一些(xiē)産量，如果對産量要求高(gāo)或者提取的DNA不用于PCR，可(kě)以嘗試略去此步驟以提高(gāo)産量。如果預計(jì)土壤成份複雜PCR抑制(zhì)物質多(duō)，可(kě)以适當提高(gāo)溶液B加入量(如加入等體(tǐ)積的溶液B)，可(kě)以提高(gāo)純度，但(dàn)是注意也會(huì)顯著降低(dī)産量。

10、13,000 rpm離心5分鍾,小(xiǎo)心轉移上(shàng)清至新的離心管（記錄上(shàng)清體(tǐ)積）。

11、加入1.5倍體(tǐ)積的溶液C（請(qǐng)先檢查是否已加入無水(shuǐ)乙醇!）,颠倒幾次，短(duǎn)暫渦旋混勻。

12、将上(shàng)一步混合物700μl（包括可(kě)能有(yǒu)的沉澱）加入一個(gè)吸附柱DA中，（吸附柱放入收集管CT中），12,000rpm離心30-60秒(miǎo)，倒掉收集管CT中的廢液。重複直到所有(yǒu)的混合物都加完。

13、加入500μl抑制(zhì)物去除液IR，12,000 rpm 離心30秒(miǎo)，棄廢液。

14、加入600μl漂洗液WB（請(qǐng)先檢查是否已加入無水(shuǐ)乙醇!），12,000 rpm 離心30秒(miǎo)，棄掉廢液。

15、加入600μl漂洗液WB，12,000 rpm 離心30秒(miǎo)，棄掉廢液。

16、将吸附柱DA放回空(kōng)收集管CT中，13,000 rpm離心2分鍾，盡量除去漂洗液，以免漂洗液中殘留乙醇抑制(zhì)下遊反應。

17、取出吸附柱DA，放入一個(gè)幹淨的離心管中，在吸附膜的中間(jiān)部位加100μl洗脫緩沖液EB（洗脫緩沖液事先在 65-70℃水(shuǐ)浴中預熱效果更好）， 室溫放置3-5分鍾，12,000 rpm 離心1分鍾。将得(de)到的溶液重新加入離心吸附柱中，室溫放置2分鍾，12,000 rpm離心1分鍾。洗脫體(tǐ)積越大(dà)，洗脫效率越高(gāo)，如需要DNA濃度較高(gāo)，可(kě)以适當減少(shǎo)洗脫體(tǐ)積， 但(dàn)是最小(xiǎo)體(tǐ)積不應少(shǎo)于50μl，體(tǐ)積過小(xiǎo)降低(dī)DNA洗脫效率，減少(shǎo)DNA産量。

18、DNA可(kě)以存放在2-8℃,如果要長時(shí)間(jiān)存放，可(kě)以放置在－20℃。