一、适用範圍：

适用于快速提取各種福爾馬林固定和(hé)石蠟包埋組織DNA。

二、試劑盒組成、儲存、穩定性：

                                    本試劑盒在室溫儲存12個(gè)月不影(yǐng)響使用效果。

三、儲存事項:

結合液CB或者抑制(zhì)物去除液IR低(dī)溫時(shí)可(kě)能出現析出和(hé)沉澱，可(kě)以在37℃水(shuǐ)浴幾分鍾幫助重新溶解，恢複澄清透明(míng)後冷卻到室溫即可(kě)使用。

為(wèi)避免降低(dī)活性、方便運輸，提供蛋白酶K為(wèi)凍幹粉狀，收到後，可(kě)短(duǎn)暫離心後，10mg/20mg加入0.5ml/1ml滅菌水(shuǐ)溶解，因為(wèi)反複凍融可(kě)能會(huì)降低(dī)酶活性，因此溶解後立即按照每次使用量分裝凍存，－20℃保存。

避免試劑長時(shí)間(jiān)暴露于空(kōng)氣中産生(shēng)揮發、氧化、pH值變化，各溶液使用後應及時(shí)蓋緊蓋子。

四、産品介紹：

福爾馬林固定或者石蠟包埋組織通(tōng)過獨特裂解液熱處理(lǐ)和(hé)蛋白酶K共同作(zuò)用迅速裂解細胞釋放出基因組DNA，然後基因組DNA在高(gāo)離序鹽狀态下選擇性吸附于離心柱內(nèi)矽基質膜， 再通(tōng)過一系列快速的漂洗－離心的步驟， 抑制(zhì)物去除液和(hé)漂洗液将細胞代謝物、蛋白等雜質去除， 最後低(dī)鹽的洗脫緩沖液将純淨基因組DNA從矽基質膜上(shàng)洗脫。

五、産品特點：

① 離心吸附柱內(nèi)矽基質膜全部采用世界著名公司特制(zhì)吸附膜，柱與柱之間(jiān)吸附量差異極小(xiǎo)，可(kě)重複性好。

② 不需要使用有(yǒu)毒的苯酚等試劑，也不需要乙醇沉澱等步驟。

③ 快速，簡捷，單個(gè)樣品操作(zuò)一般可(kě)在30分鍾內(nèi)完成。

④ 多(duō)次柱漂洗确保高(gāo)純度，OD260/OD280典型的比值達1.7～1.9，長度可(kě)達30kb -50kb，可(kě)直接用于PCR，Southern-blot和(hé)各種酶切反應。

六、注意事項：

① 所有(yǒu)的離心步驟均在室溫完成，使用轉速可(kě)以達到13,000rpm的傳統台式離心機。

② 需要自備乙醇（需要準備100%/80%/60%/40%不同濃度）或者二甲苯。

③ 實驗前将需要的水(shuǐ)浴先預熱到37℃備用。

④ 結合液CB和(hé)抑制(zhì)物去除液IR中含有(yǒu)刺激性化合物，操作(zuò)時(shí)要戴乳膠手套，避免沾染皮膚，眼睛和(hé)衣服。若沾染皮膚、眼睛時(shí)，要用大(dà)量清水(shuǐ)或者生(shēng)理(lǐ)鹽水(shuǐ)沖洗。

⑤ 洗脫液EB不含有(yǒu)螯合劑EDTA，不影(yǐng)響下遊酶切、連接等反應。也可(kě)以使用水(shuǐ)洗脫，但(dàn)應該确保批pH大(dà)于7.5， pH過低(dī)影(yǐng)響洗脫效率。用水(shuǐ)洗脫DNA應該保存在－20℃。DNA如果需要長期保存，可(kě)以用TE緩沖液洗脫（10mM Tris-HCl， 1mM EDTA，pH 8.0），但(dàn)是EDTA可(kě)能影(yǐng)響下遊酶切反應，使用時(shí)可(kě)以适當稀釋。

七、操作(zuò)步驟：（實驗前請(qǐng)先閱讀注意事項）

提示：第一次使用前請(qǐng)先在漂洗液WB中加入指定量無水(shuǐ)乙醇，充分混勻，加入後請(qǐng)及時(shí)在方框打鈎标記已加入乙醇，以免多(duō)次加入!

1、将組織切片放入離心管子，浸泡在二甲苯中脫蠟約30分鍾（具體(tǐ)時(shí)間(jiān)根據切片厚度調整）。

2、将切片依次放入100%乙醇/80%乙醇/60%乙醇/40%乙醇/去離子水(shuǐ)，每個(gè)液體(tǐ)中浸泡10秒(miǎo)鍾重新水(shuǐ)化切片。剛放入100%乙醇時(shí)，應該見到切片變白。

3、顯微鏡觀察下，用刀片切下拟提取DNA的目标組織，放入預先稱重的1.5ml離心管。再次稱重，計(jì)算(suàn)出切片組織重量。

4、在25-50mg組織中加入200μl裂解液FTL,再加入20μl的蛋白酶K溶液(20mg/ml)，立即混勻混勻後置37℃水(shuǐ)浴過夜。

5、再加入10μl的蛋白酶K溶液(20mg/ml)，混勻後55℃水(shuǐ)浴1-2小(xiǎo)時(shí)。此步驟後，不應該出現粗大(dà)的組織顆粒。

6、加入200μl 結合液CB，立刻渦旋振蕩20秒(miǎo)充分混勻後置70℃水(shuǐ)浴10分鍾。

7、冷卻後加入100μl 異丙醇，立刻渦旋振蕩30秒(miǎo)充分混勻，此時(shí)可(kě)能會(huì)出現絮狀沉澱。

8、用1毫升的槍頭吸取混合物，将混合物加入一個(gè)吸附柱DA中，（吸附柱放入收集管CT中）13,000rpm離心60秒(miǎo)，倒掉收集管CT中的廢液。如果有(yǒu)不溶組織物可(kě)能堵住槍頭，可(kě)将槍頭在吸水(shuǐ)紙上(shàng)輕蹭去除不溶物；如果吸上(shàng)來(lái)的混合物少(shǎo)則可(kě)以将槍頭和(hé)不溶物一起棄去，該做(zuò)法是為(wèi)了去除不溶物，以免堵塞離心柱。

9、加入500μl抑制(zhì)物去除液IR，12,000rpm 離心30秒(miǎo)，棄廢液。

10、加入600μl漂洗液WB（請(qǐng)先檢查是否已加入無水(shuǐ)乙醇!），12,000rpm 離心30秒(miǎo)，棄掉廢液。

11、加入600μl漂洗液WB，12,000rpm 離心30秒(miǎo)，棄掉廢液。

12、将吸附柱DA放回空(kōng)收集管CT中，13,000rpm離心2分鍾，盡量除去漂洗液， 以免漂洗液中殘留乙醇抑制(zhì)下遊反應。

13、取出吸附柱DA，放入一個(gè)幹淨的離心管中，在吸附膜的中間(jiān)部位加100μl洗脫緩沖液EB （洗脫緩沖液事先在65-70℃水(shuǐ)浴中預熱效果更好）， 室溫放置3-5分鍾，12,000rpm 離心1分鍾。将得(de)到的溶液重新加入離心吸附柱中，室溫放置2分鍾，12,000rpm離心1分鍾。

洗脫體(tǐ)積越大(dà)，洗脫效率越高(gāo)，如果需要DNA濃度較高(gāo)，可(kě)以适當減少(shǎo)洗脫體(tǐ)積， 但(dàn)是最小(xiǎo)體(tǐ)積不應少(shǎo)于50μl，體(tǐ)積過小(xiǎo)降低(dī)DNA洗脫效率，減少(shǎo)DNA産量。

14、DNA可(kě)以存放在2-8℃，如果要長時(shí)間(jiān)存放，可(kě)以放置在－20℃。

八、附錄：另外一種脫蠟方式

1、将目标組織切片放入離心管，加入1ml 100%二甲苯，渦旋振蕩10秒(miǎo)。瞬間(jiān)離心把組織全部浸入到二甲苯。

2、50℃水(shuǐ)浴3分鍾熔解石蠟，20-25℃最高(gāo)速離心2分鍾，收集組織到管底。

3、小(xiǎo)心用移液器(qì)吸棄上(shàng)清二甲苯，注意不要吸到沉澱。

4、加入1ml無水(shuǐ)乙醇，渦旋振蕩，最高(gāo)速離心2分鍾，小(xiǎo)心吸棄上(shàng)清乙醇。

5、加入1ml無水(shuǐ)乙醇，重複步驟4，盡可(kě)能吸棄所有(yǒu)乙醇。

6、室溫或者37℃ 晾幹乙醇10分鍾或直到所有(yǒu)乙醇揮發幹。

九、問題與解決方法：