1/适用範圍：

适合于從口腔/咽拭子中分離純化基因組DNA。

2/試劑盒組成、儲存、穩定性：

                                 本試劑盒在室溫儲存12個(gè)月不影(yǐng)響使用效果

3/儲存事項：

1、結合液CB或者抑制(zhì)物去除液IR低(dī)溫時(shí)可(kě)能出現析出和(hé)沉澱，可(kě)以在37℃水(shuǐ)浴幾分鍾幫助重新溶解，恢複澄清透明(míng)後冷卻到室溫即可(kě)使用。

2、為(wèi)避免降低(dī)活性，方便運輸，提供蛋白酶K為(wèi)凍幹粉狀，收到後，可(kě)短(duǎn)暫離心後，加入1ml滅菌水(shuǐ)溶解。因為(wèi)反複凍融可(kě)能會(huì)降低(dī)酶活性，因此溶解後立即按照每次使用量分裝凍存，－20℃保存。

3、避免試劑長時(shí)間(jiān)暴露于空(kōng)氣中發生(shēng)揮發、氧化、pH值變化，各溶液使用後應及時(shí)蓋緊蓋子。

4/産品介紹：

本試劑盒采用特制(zhì)的進口DNA吸附柱和(hé)獨特的緩沖液系統，特别适合于從口腔/咽拭子中分離純化基因組DNA。各種來(lái)源樣品裂解消化處理(lǐ)後DNA在高(gāo)離序鹽狀态下選擇性吸附于離心柱內(nèi)矽基質膜（特别配備Poly Carrier可(kě)以從體(tǐ)系中輕松捕獲微量核酸），再通(tōng)過一系列快速的漂洗－離心的步驟，将鹽、細胞代謝物、蛋白等雜質去除，最後低(dī)鹽的洗脫緩沖液将純淨的基因組DNA從矽基質膜上(shàng)洗脫。純化後的DNA無雜質和(hé)PCR抑制(zhì)劑，可(kě)直接适用于PCR分析。典型産量0.5μg-3.5μg/拭子。

5/産品特點：

1、不需要使用有(yǒu)毒的苯酚等試劑，也不需要乙醇沉澱等步驟。

2、節省時(shí)間(jiān)，簡捷，單個(gè)樣品操作(zuò)一般可(kě)在20分鍾內(nèi)完成。

3、配備了Poly Carrier 用于充分收集特别微量DNA。

4、多(duō)次柱漂洗确保高(gāo)純度，提取的DNA 純度高(gāo)，質量穩定可(kě)靠，可(kě)适用于各種常規操作(zuò)，包括PCR、酶切、測序、Southern 雜交等。

6/注意事項：

1、所有(yǒu)的離心步驟均在室溫完成，使用轉速可(kě)以達到13,000rpm的傳統台式離心機。

2、開(kāi)始實驗前将需要的水(shuǐ)浴先預熱到特定溫度備用。/3、結合液CB和(hé)抑制(zhì)物去除液IR中含有(yǒu)刺激性化合物，操作(zuò)時(shí)戴乳膠手套，避免沾染皮膚、眼睛和(hé)衣服。若沾染皮膚、眼睛時(shí)，要用大(dà)量清水(shuǐ)或者生(shēng)理(lǐ)鹽水(shuǐ)沖洗。

4、Poly Carrier：Poly Carrier 使用方法：如果起始處理(lǐ)量很(hěn)少(shǎo)（口腔咽拭子上(shàng)收集到的細胞很(hěn)少(shǎo)），我們推薦使用Poly Carrier，如果預期有(yǒu)較大(dà)量DNA産量，用戶可(kě)以根據需要選擇是否加入PolyCarrier。使用時(shí)在每個(gè)樣品提取所需400μl結合液CB 中加入4μl Poly Carrier，将結合液CB 與Poly Carrier溶液充分颠倒混勻即可(kě)(結合液CB容易起泡沫,請(qǐng)勿使用渦旋振蕩混勻)。也可(kě)根據樣品數(shù)量，在總共需要的結合液CB中加入總共需要的Poly Carrier混勻備用。混合液在室溫24小(xiǎo)時(shí)內(nèi)穩定。

7/操作(zuò)步驟：（實驗前請(qǐng)先閱讀注意事項）

提示：第一次使用前請(qǐng)先在15ml漂洗液WB中加入60ml無水(shuǐ)乙醇，充分混勻，加入後請(qǐng)及時(shí)在方框打鈎标記已加入乙醇，以免多(duō)次加入!

取樣：取一根醫(yī)用消毒棉簽（手不要碰觸脫脂棉部位），伸進口腔，緊靠臉頰內(nèi)側來(lái)回刮拭20次（不時(shí)旋轉棉棒），需充分接觸口腔粘膜。

注意事項：避免用手觸及棉簽，采集前可(kě)先用清水(shuǐ)輕輕漱口。為(wèi)防止樣本被食物或者飲料污染，取樣前30分鍾內(nèi)應該避免進食或者飲水(shuǐ)。

1、用剪刀将棉簽部分從其杆上(shàng)剪下，放入2ml 離心管中，加入400μl裂解液ML。

2、再加入20μl的蛋白酶K (20mg/ml)溶液，立刻渦旋振蕩充分混勻，

3、可(kě)選步驟（一般不需要做(zuò)）：56℃放置1小(xiǎo)時(shí)，期間(jiān)每10分鍾渦旋混勻10秒(miǎo)。

一般情況下該步驟可(kě)以省略，除非效果不好，再嘗試加做(zuò)此步驟 。

4、加入400μl結合液CB，立刻渦旋振蕩充分混勻，70℃放置10分鍾。此時(shí)溶液應變清亮，簡短(duǎn)離心以去除管蓋內(nèi)壁的液滴，然後擠壓去除拭子，将盡可(kě)能多(duō)的裂解液轉移至新的離心管。

棉簽的棉花(huā)可(kě)能還(hái)吸附一些(xiē)液體(tǐ)，如果要提高(gāo)産量，可(kě)以用幹淨鑷子夾擠出液體(tǐ)後棄棉花(huā)，減少(shǎo)棉花(huā)上(shàng)液體(tǐ)殘留。

如果拭子上(shàng)細胞數(shù)量少(shǎo)，導緻提取的基因組DNA産量過低(dī)于1μg, 可(kě)以在400μl結合液CB 中加入4μl Poly Carrier 。

5、冷卻後加200μl 無水(shuǐ)乙醇，立刻渦旋振蕩充分混勻。簡短(duǎn)離心以除去管蓋內(nèi)壁的液滴，收集所有(yǒu)的液體(tǐ)到管底。

如果周圍環境高(gāo)于25℃,乙醇需要冰上(shàng)預冷後再加入。

6、将上(shàng)一步混合物加入一個(gè)吸附柱DA中，（吸附柱放入收集管CT中）12,000rpm離心30-60秒(miǎo)，倒掉收集管CT中的廢液。

7、加入500μl抑制(zhì)物去除液IR，12,000rpm 離心30秒(miǎo)，棄廢液。

8、加入500μl漂洗液WB（請(qǐng)先檢查是否已加入無水(shuǐ)乙醇!），12,000rpm 離心30秒(miǎo)，棄掉廢液。

9、加入500μl漂洗液WB，12,000rpm 離心30秒(miǎo)，棄掉廢液。

10、将吸附柱DA放回空(kōng)收集管CT中，13,000rpm離心2分鍾，盡量除去漂洗液， 以免漂洗液中殘留乙醇抑制(zhì)下遊反應。

11、取出吸附柱DA，放入一個(gè)幹淨的離心管中，在吸附膜的中間(jiān)部位加20－50μl洗脫緩沖液EB （洗脫緩沖液事先在65-70℃水(shuǐ)浴中預熱效果更好）， 室溫放置1分鍾，12,000rpm 離心1分鍾。将得(de)到的溶液重新加入離心吸附柱中，室溫放置1分鍾，12,000rpm離心1分鍾。

洗脫體(tǐ)積越大(dà)，洗脫效率越高(gāo)，如果需要DNA濃度較高(gāo)，可(kě)以适當減少(shǎo)洗脫體(tǐ)積， 但(dàn)是最小(xiǎo)體(tǐ)積不應少(shǎo)于20μl，體(tǐ)積過小(xiǎo)降低(dī)DNA洗脫效率，減少(shǎo)DNA産量。

12、DNA可(kě)以短(duǎn)暫存放在2-8℃，如果要長時(shí)間(jiān)存放，可(kě)以放置在－20℃。

8/問題與解決方法