1/适用範圍：

适用于快速提取凋亡DNA Ladder。 

2/試劑盒組成、儲存、穩定性：

                             本試劑盒在室溫儲存12個(gè)月不影(yǐng)響使用效果。

3/儲存事項:

① 裂解/結合液CB低(dī)溫時(shí)可(kě)能出現析出和(hé)沉澱，可(kě)以在37℃水(shuǐ)浴幾分鍾幫助重新溶解，恢複澄清透明(míng)後冷卻到室溫即可(kě)使用。

② 避免試劑長時(shí)間(jiān)暴露于空(kōng)氣中産生(shēng)揮發、氧化、pH值變化，各溶液使用後應及時(shí)蓋緊蓋子。

4/産品介紹：

細胞發生(shēng)凋亡時(shí)，染色質DNA在核小(xiǎo)體(tǐ)之間(jiān)發生(shēng)斷裂，最終形成200bp整數(shù)倍的DNA片段，這些(xiē)DNA片段被提取後，經電(diàn)泳及溴化乙錠染色後形成梯子狀外觀，謂之DNA Ladder。血液和(hé)組織培養細胞在裂解/結合液中裂解後，釋放出來(lái)的DNA片段在高(gāo)離序鹽狀态下選擇性吸附于離心柱內(nèi)矽基質膜，再通(tōng)過一系列快速的漂洗－離心的步驟，将鹽、細胞代謝物、蛋白等雜質去除，最後低(dī)鹽的洗脫緩沖液将DNA  Ladder片段從矽基質膜上(shàng)洗脫。

5/産品特點：

① 不需要使用有(yǒu)毒的苯酚等試劑，也不需要乙醇沉澱等步驟。

② 本公司獨有(yǒu)的裂解/結合液配方有(yǒu)效裂解細胞，使用本試劑盒不需要加入昂貴的蛋白酶K處理(lǐ)，大(dà)大(dà)降低(dī)了使用成本和(hé)加快了處理(lǐ)速度。

③ 節省時(shí)間(jiān)，簡捷，單個(gè)樣品操作(zuò)一般可(kě)在10分鍾內(nèi)完成。

6/注意事項

1、所有(yǒu)的離心步驟均在室溫完成，使用轉速可(kě)以達到13,000rpm的傳統台式離心機。

2、開(kāi)始實驗前将需要的水(shuǐ)浴先預熱到70℃備用。

3、裂解/結合液CB含有(yǒu)刺激性化合物，操作(zuò)時(shí)要戴乳膠手套，避免沾染皮膚，眼睛和(hé)衣服。若沾染皮膚、眼睛時(shí)，要用大(dà)量清水(shuǐ)或者生(shēng)理(lǐ)鹽水(shuǐ)沖洗。

4、一般2×106培養細胞DNA産量為(wèi)10-20μg， 200μl人(rén)全血典型産量為(wèi)3-6μg。

5、一般電(diàn)泳檢測時(shí)典型上(shàng)樣量為(wèi)2-3μg純化的DNA，如果凋亡率低(dī)，有(yǒu)可(kě)能隻見到基因組DNA，而見不到DNA ladder，可(kě)以加大(dà)上(shàng)樣量。

7/操作(zuò)步驟：（實驗前請(qǐng)先閱讀注意事項）

提示： 第一次使用前請(qǐng)先在漂洗液WB中加入指定量無水(shuǐ)乙醇，充分混勻，加入後請(qǐng)及時(shí)在方框打鈎标記已加入乙醇，以免多(duō)次加入!

1、取2×106個(gè)細胞（懸浮細胞或者組織培養細胞重懸在200μl PBS中）或者200μl全血（大(dà)約含有(yǒu)2×106個(gè)細胞）加入200μl 裂解/結合液CB，立刻渦旋振蕩充分混勻。

可(kě)選做(zuò)步驟: 如果RNA殘留較多(duō)，影(yǐng)響凋亡DNA ladder的觀察，可(kě)以在加入200μl裂解/結合液CB 前加20μl RNase A(25mg/ml)溶液，振蕩混勻，室溫放置5-10分鍾。

細胞或者全血處理(lǐ)起始量最大(dà)可(kě)達300μl，如果起始量介于200μl-300μl之間(jiān)，則需要按比例相應提高(gāo)後面使用試劑量。

2、室溫（15℃-20℃）放置10分鍾。

3、加入100μl 異丙醇，立刻渦旋振蕩充分混勻，此時(shí)可(kě)能會(huì)出現絮狀沉澱。

上(shàng)述步驟中适當力度充分混勻非常重要，混勻不充分嚴重降低(dī)産量。如果樣品粘稠不易混勻，則可(kě)以渦旋振蕩15秒(miǎo)。

4、将上(shàng)一步混合物（包括可(kě)能有(yǒu)的沉澱）加入一個(gè)吸附柱DA中，（吸附柱放入收集管CT中）13,000rpm離心30秒(miǎo)，倒掉收集管CT中的廢液。

5、加入600μl漂洗液WB（請(qǐng)先檢查是否已加入無水(shuǐ)乙醇!），12,000rpm 離心30秒(miǎo)，棄掉廢液。

6、加入600μl漂洗液WB，12,000rpm 離心30秒(miǎo)，棄掉廢液。

7、将吸附柱DA放回空(kōng)收集管CT中，13,000rpm離心2分鍾，盡量除去漂洗液， 以免漂洗液中殘留乙醇影(yǐng)響洗脫效率和(hé)下遊反應。

8、取出吸附柱DA，放入一個(gè)幹淨的離心管中，在吸附膜的中間(jiān)部位加100μl洗脫緩沖液EB（洗脫緩沖液事先在 65-70℃水(shuǐ)浴中預熱）， 室溫放置3-5分鍾，12,000rpm 離心1分鍾。将得(de)到的溶液重新加入離心吸附柱中，室溫放置2分鍾，12,000rpm離心1分鍾。

洗脫體(tǐ)積越大(dà)，洗脫效率越高(gāo)，如果需要DNA濃度較高(gāo)，可(kě)以适當減少(shǎo)洗脫體(tǐ)積， 但(dàn)是最小(xiǎo)體(tǐ)積不應少(shǎo)于50μl，體(tǐ)積過小(xiǎo)降低(dī)DNA洗脫效率，減少(shǎo)DNA産量。

9、DNA可(kě)以直接使用或者存放在－20℃，但(dàn)是不要超過14天。

10、取大(dà)約2-3μg純化的DNA電(diàn)泳檢測（注意200μl人(rén)全血典型産量隻有(yǒu)3-6μg）。

8/問題與解決方法: