1/适用範圍：

适用于快速提取各種酵母基因組DNA。

2/試劑盒組成、儲存、穩定性：

                               本試劑盒在室溫儲存12個(gè)月不影(yǐng)響使用效果。

3/儲存事項:

1、環境溫度低(dī)時(shí)酵母裂解液YS中某些(xiē)去污劑成份會(huì)析出出現渾濁或者沉澱，可(kě)在37℃水(shuǐ)浴加熱幾分鍾，輕輕旋搖，即可(kě)恢複澄清，不要劇(jù)烈搖晃，以免形成過量的泡沫。

2、蛋白沉澱液PPS可(kě)能出現析出和(hé)沉澱，可(kě)以在37℃水(shuǐ)浴幾分鍾幫助重新溶解，如果不能完全溶解，也不影(yǐng)響使用效果，直接取用上(shàng)層溶液即可(kě)。

3、避免試劑長時(shí)間(jiān)暴露于空(kōng)氣中産生(shēng)揮發、氧化、pH值變化，各溶液使用後應及時(shí)蓋緊蓋子。

4/産品介紹：

本試劑盒用于快速的從酵母中提取基因組DNA。在針對酵母細胞特點配制(zhì)的酵母裂解液作(zuò)用下， 酵母細胞被裂解釋放出基因組DNA，然後蛋白沉澱液選擇性沉澱去除蛋白，最後純淨的基因組DNA通(tōng)過異丙醇沉澱并重溶解于DNA溶解液。

5/産品特點：

1、不需要使用有(yǒu)毒的苯酚、氯仿等試劑。

2、快速，簡捷，整個(gè)過程可(kě)在1個(gè)小(xiǎo)時(shí)內(nèi)完成。

3、結果穩定，産量高(gāo)（比離心柱型的産量高(gāo)一倍以上(shàng)），OD260/OD280典型的比值達1.7～1.9，長度可(kě)達50Kb-150kb，可(kě)直接用于PCR，Southern-blot和(hé)各種酶切反應以及文庫構建。

6/操作(zuò)步驟：（實驗前請(qǐng)先閱讀注意事項）

1、吸取1.5ml 酵母培養物到一個(gè)1.5ml離心管； 12,000rpm離心2分鍾，盡可(kě)能棄上(shàng)清，必要時(shí)候可(kě)以用槍吸去。

2、高(gāo)速渦旋振蕩，打散重懸酵母細胞團。

3、加入300μl酵母裂解液YS，渦旋振蕩混勻，或者用1ml的槍頭反複吹打混勻。

酵母細胞的重懸分散對下一步裂解非常重要，必須充分分散重懸。

4、将裂解物放置在70℃水(shuǐ)浴15-30分鍾。

如果産量低(dī)，可(kě)以适當提高(gāo)水(shuǐ)浴溫度和(hé)延長水(shuǐ)浴時(shí)間(jiān)，中間(jiān)可(kě)以渦旋振蕩混勻幾次幫助裂解。

5、冰上(shàng)至少(shǎo)5分鍾使回複到室溫。

6、在回複到室溫的裂解物內(nèi)加入100μl蛋白沉澱液PPS後，在渦旋振蕩器(qì)上(shàng)高(gāo)速連續振蕩混勻20秒(miǎo)。混勻後可(kě)能見到一些(xiē)小(xiǎo)的蛋白團塊。冰浴5分鍾。

7、13,000rpm離心5-10分鍾。這時(shí)應該可(kě)以見到管底蛋白沉澱，也可(kě)能見到一些(xiē)蛋白沉澱漂浮在液體(tǐ)表面。

8、小(xiǎo)心緩慢吸取上(shàng)清到一個(gè)新的1.5ml離心管中，不要吸到沉澱。

吸取上(shàng)清時(shí)，注意不要吸到管底的和(hé)漂浮在液體(tǐ)表面的蛋白沉澱。如果不小(xiǎo)心将蛋白沉澱轉入新的離心管中，可(kě)再次離心2分鍾後取上(shàng)清。

9、加入等體(tǐ)積的室溫異丙醇（約400μl），颠倒30次混勻或者直到出現絮狀DNA沉澱（或者白色渾濁沉澱）。

10、12,000rpm離心1分鍾，在管底可(kě)以見到白色的DNA沉澱塊，倒棄上(shàng)清。

11、加入1ml 70％乙醇，颠倒幾次漂洗DNA沉澱，12,000rpm離心1分鍾， 倒去上(shàng)清（注意不要把DNA沉澱倒掉了），倒置後在吸水(shuǐ)紙上(shàng)輕敲幾下以控幹殘留乙醇，還(hái)可(kě)以用槍頭小(xiǎo)心吸掉管底沉澱周圍和(hé)管壁的殘留乙醇，空(kōng)氣晾幹沉澱幾分鍾。

注意不要幹燥過頭，否則DNA極其難溶；也不能殘留太多(duō)乙醇，否則乙醇可(kě)能抑制(zhì)下遊如酶切反應。

12、加入40μl DNA溶解液DS重新水(shuǐ)化溶解DNA沉澱，輕彈管壁混勻，可(kě)以放置在65℃溫育30-60分鍾（不要超過一小(xiǎo)時(shí)），也可(kě)以在室溫或者4℃放置過夜來(lái)重新水(shuǐ)化DNA。期間(jiān)不時(shí)的輕彈管壁幫助重新水(shuǐ)化DNA。

13、加入10-15μl RNase A（10mg/ml），或者1-2μl RNase A（100mg/ml）颠倒混勻，37℃溫育30－60分鍾去除殘留RNA。

該步驟主要作(zuò)用為(wèi)去除殘留的RNA，如果殘留RNA多(duō)，可(kě)以适當延長時(shí)間(jiān)。如果殘留RNA不影(yǐng)響實驗，可(kě)略去該步驟。如果殘留的RNA酶可(kě)能影(yǐng)響實驗，也可(kě)以用等體(tǐ)積酚/氯仿抽提去除，然後用标準的乙醇沉澱回收DNA。

14、DNA可(kě)以存放在2-8℃，如果要長時(shí)間(jiān)存放，可(kě)以放置在－20℃。