1/适用範圍：

适用于快速提取各種動物全血基因組DNA。

2/試劑盒組成、儲存、穩定性：

本試劑盒在室溫儲存18個(gè)月不影(yǐng)響使用效果。

3/儲存事項:

① 環境溫度低(dī)時(shí)細胞核裂解液NLS中某些(xiē)去污劑成份會(huì)析出出現渾濁或者沉澱，可(kě)在37℃水(shuǐ)浴加熱幾分鍾，即可(kě)恢複澄清，不要劇(jù)烈搖晃，以免形成過量的泡沫。

② 蛋白沉澱液PPS可(kě)能出現析出和(hé)沉澱，可(kě)以在37℃水(shuǐ)浴幾分鍾幫助重新溶解，如果不能完全溶解，也不影(yǐng)響使用效果，直接取用上(shàng)層溶液即可(kě)。

③ 避免試劑長時(shí)間(jiān)暴露于空(kōng)氣中産生(shēng)揮發、氧化、pH值變化，各溶液使用後應及時(shí)蓋緊蓋子。

4/産品介紹：

本試劑盒根據全血特點采用幾個(gè)快速步驟提取基因組DNA。首先紅細胞裂解液RLB裂解去除不含DNA的紅細胞，細胞核裂解液NLS裂解白細胞釋放出基因組DNA，然後蛋白沉澱液PPS選擇性沉澱去除蛋白，最後純淨的基因組DNA通(tōng)過異丙醇沉澱并重溶解于DNA溶解液。

5/産品特點：

① 從十幾個(gè)配方中優選出的紅細胞裂解液RLB配方，裂解快速完全。

② 不需要使用有(yǒu)毒的苯酚等試劑。

③ 快速，簡捷，單個(gè)樣品操作(zuò)一般可(kě)在1小(xiǎo)時(shí)內(nèi)完成。

④ 結果穩定，産量高(gāo)（典型的産量10ml全血可(kě)提取出150-500µg），OD260/OD280典型的比值達1.7～1.9，長度可(kě)達50kb-150kb，可(kě)直接用于構建文庫、PCR、Southern-blot和(hé)各種酶切反應。

6/注意事項

① 所有(yǒu)的離心步驟均在室溫完成，使用轉速可(kě)以達到2,500 x g，并配備容納50ml心管轉頭的傳統台式離心機。

② 用戶需自備異丙醇和(hé)70％乙醇。

③ 典型的産量10ml全血可(kě)提取出150-500µg基因組DNA（不同樣品尤其疾病樣品中中白細胞數(shù)量差異可(kě)能非常大(dà)，因此産量的個(gè)體(tǐ)差異也可(kě)能非常大(dà)）。

④ 本試劑盒為(wèi)溶液型，可(kě)以很(hěn)容易的按照比例擴大(dà)或者縮小(xiǎo)每次處理(lǐ)的全血量（20µl-10ml），請(qǐng)聯系我們索取其它處理(lǐ)量的操作(zuò)手冊。

⑤ 本試劑盒可(kě)運用于多(duō)種抗凝劑的全血，如EDTA、檸檬酸、肝素抗凝血。其中由于肝素抗凝血的白細胞沉澱團很(hěn)難打散重懸，影(yǐng)響裂解效果，建議選用非肝素的抗凝劑收集血液标本。

⑥ 為(wèi)了最佳效果，最好使用新鮮血液标本或者4℃存放小(xiǎo)于3天的标本，不要使用反複凍融超過3次的标本，否則會(huì)嚴重降低(dī)産量。

7/操作(zuò)步驟：（實驗前請(qǐng)先閱讀注意事項）

1、吸取30ml 1x紅細胞裂解液RLB到一個(gè)50ml離心管。使用前應該用去離子水(shuǐ)将10x紅細胞裂解液RLB稀釋10倍到1x。

2、将抗凝全血（使用前回複到室溫）颠倒混勻後，吸取10ml加到上(shàng)步裝有(yǒu)紅細胞裂解液RLB離心管中，颠倒6-8次，并倒置輕彈管壁，确保充分混勻。

3、室溫放置10分鍾（期間(jiān)應該颠倒輕彈混勻數(shù)次幫助裂解紅細胞）。

4、2,500 x g離心2分鍾，倒棄紅色上(shàng)清，并小(xiǎo)心的盡可(kě)能多(duō)的吸棄上(shàng)清（注意不要吸到管底的細胞團），留下完整的管底白細胞團和(hé)大(dà)約100μl的殘留上(shàng)清。

離心後在管底應該見到白色的白細胞團，也可(kě)能有(yǒu)一些(xiē)紅細胞殘片和(hé)白細胞團在一起，但(dàn)是如果看到的是大(dà)部分的紅色細胞團，說明(míng)紅細胞裂解很(hěn)不充分，應該再加入适量紅細胞裂解液RLB重懸細胞團後重複步驟3，4。

5、渦旋振蕩直到白細胞團充分重懸、分散。

白細胞的重懸分散對下一步裂解非常重要，白細胞未打散就加入裂解液，會(huì)導緻白細胞不能充分裂解，形成肉眼可(kě)見團塊。

6、加入10ml細胞核裂解液NLS到重懸的白細胞，上(shàng)下吹打裂解白細胞，或者劇(jù)烈渦旋10秒(miǎo)幫助裂解白細胞。

7、可(kě)選步驟: 在裂解物中加入RNase A（10mg/ml）至終濃度30μg/ml，颠倒25次混勻，37℃溫育15分鍾去除殘留RNA，然後冷卻回室溫。

8、加入3.33ml蛋白沉澱液PPS後，在渦旋振蕩器(qì)上(shàng)高(gāo)速連續振蕩混勻25秒(miǎo)。混勻後可(kě)能見到一些(xiē)小(xiǎo)的蛋白團塊。

9、2,500 x g(可(kě)根據需要調整加大(dà)離心力)離心5分鍾。這時(shí)候應該可(kě)以見到管底暗褐色的蛋白沉澱，也可(kě)能見到一些(xiē)蛋白沉澱漂浮在液體(tǐ)表面。

10、小(xiǎo)心吸取上(shàng)清（大(dà)約10ml）到一個(gè)新的50ml離心管中。

吸取上(shàng)清時(shí)，注意不要吸到管底的和(hé)漂浮在液體(tǐ)表面的蛋白沉澱。如果不小(xiǎo)心将蛋白沉澱轉入新的離心管中，可(kě)再次離心2分鍾後取上(shàng)清。

11、加入等體(tǐ)積的室溫異丙醇（約10ml），輕柔颠倒30次混勻或者直到出現棉絮狀（絲狀）白色DNA沉澱。

12、2,000 x g離心3分鍾，在管底可(kě)以見到白色的DNA沉澱塊，倒棄上(shàng)清。

13、加入10ml 70％乙醇，颠倒幾次漂洗DNA沉澱， 2,000 x g離心1分鍾, 倒去上(shàng)清（沉澱很(hěn)松，注意不要把DNA沉澱倒掉了），倒置後在吸水(shuǐ)紙上(shàng)輕敲幾下以控幹殘留乙醇，還(hái)可(kě)以用槍頭小(xiǎo)心吸掉管底沉澱周圍和(hé)管壁的殘留乙醇，空(kōng)氣晾幹沉澱幾分鍾。

注意不要幹燥過頭，否則DNA極其難溶；也不能殘留太多(duō)乙醇，否則乙醇可(kě)能抑制(zhì)下遊如酶切反應。

14、加入600μlDNA溶解液DS（如果需要濃度高(gāo)，可(kě)根據需要減少(shǎo)DNA溶解液DS用量）重新水(shuǐ)化溶解DNA沉澱，輕彈管壁混勻，可(kě)以放置在65℃溫育30-60分鍾（不要超過一小(xiǎo)時(shí)），也可(kě)以在室溫或者4℃放置過夜來(lái)重新水(shuǐ)化DNA，中間(jiān)不時(shí)的輕彈管壁幫助重新水(shuǐ)化DNA。

15、DNA可(kě)以存放在2-8℃,如果要長時(shí)間(jiān)存放，可(kě)以放置在－20℃。

8/問題與解決方法